本发明公开了一种新型重组(R)‑ω‑转氨酶、突变体及其在制备西他列汀中的应用,该新型重组(R)‑ω‑转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第214位和第146位经单点或二点突变得到。本发明先通过基因重组技术获得高酶活的新型重组(R)‑ω‑转氨酶,再进一步通过定点突变获得新型重组(R)‑ω‑转氨酶突变体,该突变体不仅具有高酶活(785.2U/g)、高立体选择特性(e.e.值99.9%),而且能够高效催化前体酮底物制备西他列汀,转化率最高可达97.1%。
本发明公开了一种重组脂肪酶突变体、基因、载体、工程菌及其应用,所述突变体是丝孢堆黑粉菌脂肪酶(Sporisoriumreilianum SRZ2lipase,SRL)出发经过突变得到的。本发明中,脂肪酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第145位、194位进行单突变或者组合突变获得的。该突变体相比于野生型酶在转化上述反应时催化活力和底物耐受性大大提高,反应进程耗时明显缩短。相比于化学法制备(S,S)‑2,8‑二氮杂双环[4,3,0]壬烷,本发明提供的技术所得产品立体选择性高,反应条件更加温和,对设备要求低,降低了反应成本,且对环境友好。
本发明公开了一种重组脂肪酶突变体、工程菌及其制备(2S,3R)‑N‑乙酰‑哌啶‑2,3‑二甲酸二甲酯应用,所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第140位、141位、144位、189位、第190位进行单突变或者组合突变获得的。该突变体相比于野生型酶在转化上述反应时催化活力和底物耐受性大大提高,反应进程耗时明显缩短。相比于化学法制备(S,S)‑2,8‑二氮杂双环[4,3,0]壬烷,本发明提供的技术所得产品立体选择性高,反应条件更加温和,对设备要求低,降低了反应成本,且对环境友好。
本发明公开了一种耐酸性微生物转谷酰胺酶及其编码基因。一种耐酸性微生物转谷酰胺酶,氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码所述的耐酸性微生物转谷酰胺酶的基因,核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。该酶表现出良好的耐酸性质,其最适反应pH是4.0;在pH4.0条件下,保持7天,可保持初始酶活的95%以上。本发明丰富了微生物源转谷酰胺酶基因的资源,为扩大微生物转谷酰胺酶在食品加工中的应用范围奠定了基础。