本发明属于基因检测领域,特别涉及一种基于UMI(Unique molecular identifer)单分子标签降噪技术的靶向测序检测肺癌基因的多重PCR引物、试剂盒及方法。本发明具体公开了包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:48所示的靶向捕获肺癌常见驱动基因的特异性引物的多重PCR引物、含有上述引物的试剂盒及运用上述引物或试剂盒用一次PCR扩增反应捕获和扩增肺癌常见驱动基因的检测方法。本发明的带有UMI分子标签的多重PCR引物、试剂盒和检测方法,能够同时检测多个样本多个肺癌常见驱动基因,采用的UMI单分子标签降噪技术能够有效消除PCR过程中带来的假阳性,提高了检测灵敏度、准确率,同时降低了成本、简化了操作步骤。
本发明涉及一种涉及47种基因的PCR引物以及标签PCR引物,所述标签PCR引物由PCR引物以及连接于PCR引物对中至少一条引物5’端的DNA标签序列组成,所述DNA标签序列选自SEQ ID NO107—SEQ ID NO126。本发明还涉及应用所述由标签PCR引物的DNA标签构建测序文库的方法和试剂盒。本发明所提供的检测方法与测序法的吻合率高达100%,所提供的扩增引物与DNA标签形成一个特异性、灵敏度和重复性之间达到优化、平衡的检测产品,能并行检测体细胞突变与单核苷酸多态性,一次检测能够准确区分1‑20种样本来源的多条碱基序列。
本发明公开了HER2基因扩增检测探针、试剂盒以及方法,包括有标记荧光染料的、针对HER2基因的第一组探针和针对人类17号染色体着丝粒区域的第二组探针,所述第一组探针为选自SEQ ID NO.41—SEQ ID NO.50中的至少一条探针,所述第二组探针为选自SEQ ID NO.51—SEQ ID NO.60中的至少一条探针;上述两组探针所标记的荧光染料颜色不一样。本发明所提供的HER2基因扩增检测试剂盒中的FISH探针,不含有重复序列,能够避免交叉反应,与染色体中HER2目标检测片段进行识别杂交,具有准确性高,特异性好、及假阳性低的优点。