本发明公开了一种酯酶pnbA‑BS突变体及其在制备l‑薄荷醇中的应用，所述酯酶pnbA‑BS突变体是以SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第400位丙氨酸突变为脯氨酸获得。以表达酯酶pnbA‑BS突变体A400P的基因工程菌为整细胞催化剂，催化dl‑乙酸薄荷酯的选择性拆分，恒速流加方式加入底物，底物加入量可达1700mM，产物l‑薄荷醇e.e.值99％，产物累积浓度可达600mM，反应时空得率可达160g/(L·d)。反应体系不添加有机溶剂，减少了化学品的使用，简化了产物分离工艺，是一种绿色、高效、简便的新型l‑薄荷醇制备方法。
本发明公开了一种老黄酶NemR‑PS突变体及其在制备(S)‑香茅醇中的应用，所述老黄酶NemR‑PS突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列中第275位、第351位氨基酸进行单突变或双突变获得的。通过构建共表达老黄酶NemR‑PS突变体、醇脱氢酶YsADH和葡萄糖脱氢酶BmGDHM6的基因工程菌，以该基因工程菌作为催化剂，以恒速流加方式加入底物，一锅法多酶级联催化底物(E/Z)‑柠檬醛的二步还原，产物(S)‑香茅醇累积浓度达500mM，产物e.e.值99％，反应时间仅需12h，没有中间产物和副产物残留。
本发明涉及生物催化领域，特别涉及乙醇酸氧化酶突变体及其应用。本发明公开了一种乙醇酸氧化酶突变体CreGO‑Mut及其在合成乙醛酸甲酯中的应用，所述乙醇酸氧化酶突变体CreGO‑Mut是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列中第27位酪氨酸突变为丝氨酸，同时将第111位缬氨酸突变为甘氨酸，同时将212位缬氨酸突变为精氨酸获得的。乙醇酸氧化酶突变体CreGO‑Mut相较于野生型CreGO活力提高了3.23倍。融合酶GST‑GSG‑CreGO‑Mut作为催化剂，过氧化氢酶CAT作为辅助酶，再结合氧气鼓泡，300mM乙醇酸甲酯经8h酶法氧化反应后，乙醛酸甲酯得率达93.5％。
