本发明涉及一种微生物种群绝对丰度定量的内参组合物、试剂盒及方法,内参组合物包括SEQ ID No.1‑SEQ ID No.8所示的8条内参序列,SEQ ID No.1‑SEQ ID No.8具有由低到高的浓度梯度,且内参组合物与样本的占比为10%‑30%。通过向环境样本中添加不同浓度梯度的内参DNA,量化不同微生物群落间的绝对含量,在PCR反应过程中,内参DNA分子产生预期大小的扩增子,结合内参DNA的拷贝数和测序输出的reads数,建立内参DNA拷贝数和reads间的标准曲线,进一步可计算出样本中各菌群拷贝数的绝对丰度,可以准确估算单位样品中物种的绝对丰度。本方法一次扩增实验,可以同时得到相对定量和绝对定量结果两份分析结果,节省样品与内参DNA用量,最大程度上节省测序成本。
本发明公开了一种去除核糖体RNA的反转录引物池、试剂盒及去除核糖体RNA的方法;该反转录引物池的序列如SEQ ID NO:1~10所示;该试剂盒包含上述反转录引物池,本发明利用原核生物共有的rRNA序列,设计不同密度覆盖的反转录引物,根据具体需要去除的RNA中本身的rRNA序列的差异,进行特异性的反转录,从而得到与目标RNA完全反向互补的cDNA序列,再通过后续的RNase H和DNase I特异性消化杂合链的rRNA和cDNA,最终去除核糖体RNA;该方法能够搭配建库试剂盒,最终得到浓度足够高的转录组文库,从而有效实现转录组测序在基础研究、临床诊断和药物研发等领域的广泛应用。
本发明公开了一种去除核糖体RNA的反转录引物池、试剂盒及去除核糖体RNA的方法;该反转录引物池的序列如SEQ ID NO:1~8所示;该试剂盒包含上述反转录引物池,本发明利用植物共有的rRNA序列,设计不同密度覆盖的反转录引物,根据具体需要去除的RNA中本身的rRNA序列的差异,进行特异性的反转录,从而得到与目标RNA完全反向互补的cDNA序列,再通过后续的RNase H和DNase I特异性消化杂合链的rRNA和cDNA,最终去除核糖体RNA;该方法能够搭配建库试剂盒,最终得到浓度足够高的转录组文库,从而有效实现转录组测序在基础研究、临床诊断和药物研发等领域的广泛应用。