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[发明专利]一种比较体外诱导的PGC-like细胞迁移效率的方法-CN202010853561.1有效
发明人：李碧春;袁霞;左其生;姜景译;丁颖;石祥;张明;张亚妮;孙红艳 -专利权人：扬州大学
申请日： 2020-08-24 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： G01N15/14 文献下载
摘要：一种比较体外诱导的PGC‑like细胞迁移效率的方法，属于生物技术领域。前期通过不同的诱导体系将ESCs或iPS细胞诱导分化形成PGC‑like细胞，将获得的PGC‑like细胞进行PKH26细胞膜表面标记，然后注射至孵化2.5天的受体鸡胚血管，封口后继续孵化至4.5天，分离鸡胚生殖嵴，进行冰冻切片后在荧光显微镜下观察红色荧光，并通过流式细胞术分析PKH26红色荧光的比例，从而比较不同体系诱导形成的PGC‑like细胞的迁移能力。结果发现能够明确对比出体外不同体系诱导的PGC‑like细胞的迁移能力的差异。本发明切实可靠，严谨准确，成效显著，为研究分析体外诱导的PGCs迁移归巢至生殖嵴的能力提供了一种新颖可行且高效的实验方法。
一种比较体外诱导 pgc like 细胞迁移效率方法

[发明专利]一种分离鸡雌雄原始生殖细胞的方法-CN202010868114.3在审
发明人：李碧春;石祥;左其生;张亚妮;孙红艳;靳锴;张明;姜景译;袁霞;丁颖 -专利权人：扬州大学
申请日： 2020-08-26 - 公布日： 2020-11-13 - 主分类号： C12N5/0735 文献下载
摘要：本发明提供了一种分离鸡雌雄原始生殖细胞的方法，旨在鸡胚孵化至4.5天时,取下生殖嵴，通过血液进行性别鉴定后分离出雌雄鸡胚的PGCs，将为早期干细胞的进一步应用奠定基础。本方法适用于家禽雌雄原始生殖细胞的分离，方法新颖科学，结果准确可靠。本发明可以准确的分离鸡雌雄原始生殖细胞，为PGCs在医学以及发育生物学、禽类嵌合体制备、转基因禽类的方面研究提供准确的原材料。此外，本发明中的细胞分离方法也可以应用于其他禽类研究中，具有很好的推广应用价值。
一种分离雌雄原始生殖细胞方法

[发明专利]一种诱导鸡的胚胎干细胞自噬的方法-CN202010748573.8在审
发明人：李碧春;丁颖;左其生;姜景译;袁霞;石祥;张明;张亚妮;孙红艳 -专利权人：扬州大学
申请日： 2020-07-30 - 公布日： 2020-10-30 - 主分类号： C12N5/0735 文献下载
摘要：一种诱导鸡的胚胎干细胞自噬的方法，属于生物技术领域。首先通过EdU检测添加了不同浓度雷帕霉素的细胞的增殖能力，其次荧光定量PCR检测自噬相关基因的表达量，最后蛋白免疫印迹检测LC3蛋白的表达量，结合雷帕霉素对细胞增殖效率的影响和诱导自噬发生的效果综合评价从而确定最佳诱导浓度和时间。探讨雷帕霉素对家禽生殖细胞的诱导条件将为自噬在胚胎干细胞向原始生殖细胞的诱导分化中的作用研究奠定基础。
一种诱导胚胎干细胞方法

[发明专利]一种研究鸡生殖细胞自噬的方法-CN202010748580.8在审
发明人：左其生;丁颖;李碧春;姜景译;袁霞;石祥;张明;张亚妮;孙红艳 -专利权人：扬州大学
申请日： 2020-07-30 - 公布日： 2020-10-30 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：一种研究鸡生殖细胞自噬的方法，属于生物技术领域。在生殖细胞中添加雷帕霉素激活细胞自噬，转染不同MOI值的GFP‑LC3慢病毒载体，在显微镜下观察细胞生长状态，排除MOI值过高导致细胞凋亡的分组。收集各组样品，EdU检测各组细胞的增殖效率，同时通过western‑blot检测游离的GFP蛋白和自噬标志蛋白LC3‑Ⅰ（16 ku）与LC3‑Ⅱ（14 ku）之间的转化和比例及荧光显微镜定位LC3蛋白在细胞中的表达情况综合评判该MOI值在鸡生殖细胞中的适用性。本发明操作简单，切实可行，探讨GFP‑LC3慢病毒载体在鸡生殖细胞中的转染条件是将为自噬在胚胎干细胞向原始生殖细胞的诱导分化中的作用研究奠定基础。
一种研究生殖细胞方法

[发明专利]一种研究鸡lncRNA互作蛋白的方法-CN202010724879.X在审
发明人：李碧春;姜景译;左其生;袁霞;丁颖 -专利权人：扬州大学
申请日： 2020-07-24 - 公布日： 2020-10-30 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：一种研究鸡lncRNA互作蛋白的方法，属于生物技术领域。通过设计并合成了LncPGCR的sense和antisense链来进行RNA‑pull down，筛选出互作蛋白。进一步结合RIP实验技术，对互作蛋白表达变化进行了探究，丰富了lncRNA与蛋白质互作的研究。本发明的方法简单易行，思路清晰，操作可行性高，在普通研究室就能完成。实验者两个月就能完成。本发明将lncRNA与蛋白质互作的研究扩展到家禽领域，并准确定位到LncPGCR上，刷新了不同物种中lncRNA通过与蛋白质互作发挥功能的范畴。
一种研究 lncrna 蛋白方法

[发明专利]一种研究组蛋白乙酰化调节鸡LncRNA表达的方法-CN202010723202.4在审
发明人：左其生;姜景译;李碧春;袁霞;丁颖;张晨 -专利权人：扬州大学
申请日： 2020-07-24 - 公布日： 2020-10-16 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：一种研究组蛋白乙酰化调节鸡LncRNA表达的方法，属于生物技术领域。通过对鸡LncPGCR的启动子克隆、核心调控区域选定、检测组蛋白乙酰化对鸡LncPGCR启动子活性的影响进行了探究，为进一步研究鸡LncPGCR的表达调控机制奠定基础。本发明的方法简单易行，思路清晰，操作可行性高，在普通研究室就能完成。实验者两个月就能完成。本发明将组蛋白乙酰化调节鸡LncRNA表达的研究扩展到家禽领域，并准确定位到鸡LncPGCR上，刷新了不同物种中组蛋白乙酰化调节LncRNA表达进而发挥功能的范畴。
一种研究组蛋白乙酰化调节 lncrna 表达方法

[发明专利]一种利用CRISPR-Cas9靶向敲除鸡Bmp4基因的方法-CN202010734335.1在审
发明人：李碧春;高雯;左其生;张晨;袁霞;姜景译;丁颖;张亚妮;孙红艳 -专利权人：扬州大学
申请日： 2020-07-27 - 公布日： 2020-10-16 - 主分类号： C12N15/90 文献下载
摘要：一种利用CRISPR‑Cas9靶向敲除鸡Bmp4基因的方法，属于生物技术领域。本发明通过基因编辑技术沉默基因的表达为基因功能的研究提供了重要的技术手段，RISPR‑Cas9系统属于基因编辑技术中的一种，具有敲除效率高、操作简单、成本低等优点。为此，本发明利用RISPR‑Cas9技术构建Bmp4敲除载体，不仅能够从基因组上抑制Bmp4的表达，为更准确地研究Bmp4基因在鸡原始生殖细胞（Primordial germ cells,PGCs）形成过程中的功能提供实验素材，而且也有利于为将来构建基因敲除鸡模型奠定实验基础。
一种利用 crispr cas9 靶向 bmp4 基因方法

[发明专利]一种基因组测序鉴定PGCs介导后代生成的方法-CN202010731512.0在审
发明人：李碧春;袁霞;左其生;姜景译;丁颖;石祥;张明;张亚妮;孙红艳 -专利权人：扬州大学
申请日： 2020-07-27 - 公布日： 2020-10-13 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：一种基因组测序鉴定PGCs介导后代生成的方法，属于生物技术领域。本发明的通过基因组测序鉴定PGCs介导后代生成的研究方法切实可靠，严谨准确，成效显著，为CEF转分化形成的PGC‑like细胞介导产生的后代鸡的鉴定工作提供了一种新颖可行且高效的实验方法。
一种基因组鉴定 pgcs 后代生成方法

[发明专利]一种lncRNA通过编码小肽促进PGCs形成的验证方法-CN202010571400.3在审
发明人：左其生;姜景译;李碧春;金晶;袁霞;张晨 -专利权人：扬州大学
申请日： 2020-06-22 - 公布日： 2020-09-22 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：一种lncRNA通过编码小肽促进PGCs形成的验证方法，属于生物技术领域。利用在线软件ORF Finder预测lncRNA‑BMP4可能存在的开放阅读框并构建原核融合表达载体，通过Western Blot检测获得的诱导蛋白。本方法简单易行，思路清晰，操作可行性高，在普通研究室就能完成。本发明将lncRNA通过编码小肽促进PGCs形成的研究扩展到家禽领域，并准确定位到lncRNA‑BMP4上，刷新了不同物种中lncRNA通过编码小肽形成功能的范畴。
一种 lncrna 通过编码促进 pgcs 形成验证方法

[发明专利]一种提高鸡胚成纤维细胞体外诱导重编程为iPS细胞效率的方法-CN202010416986.6在审
发明人：李碧春;袁霞;左其生;姜景译;丁颖;石祥;张明;张亚妮;孙红艳 -专利权人：扬州大学
申请日： 2020-05-18 - 公布日： 2020-08-14 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：一种提高鸡胚成纤维细胞体外诱导重编程为鸡iPS细胞效率的方法，属于生物技术领域。前期研究发现通过OSNL体系可将鸡CEF诱导重编程为iPS，但效率较低，在此基础上，研究体细胞诱导重编程过程中糖酵解代谢发挥的作用并对诱导体系进行进一步的优化。本发明操作简单，切实可行，应用广泛。由于鸡诱导多能干细胞具有发育的全能性，在适当条件下可被诱导分化为多种细胞组织，因此可作为一种新的干细胞来源，也为珍稀动物的保种、转基因动物的生产等研究开辟了新思路。本发明将小分子化合物和细胞代谢联系在一起，将为禽类体细胞诱导重编程研究提供了更多的理论基础和技术支撑，也有利于为家禽细胞和胚胎工程研究提供更多的实验材料。
一种提高鸡胚成纤维细胞体外诱导编程 ips 效率方法

[发明专利]一种研究鸡ESCs向PGCs分化过程中lin28调节Blimp1表达的方法-CN201910547131.4在审
发明人：李碧春;姜景译;左其生;王曼;李建成;张明;石祥;袁霞 -专利权人：扬州大学
申请日： 2019-06-24 - 公布日： 2019-09-20 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明涉及一种研究鸡ESCs向PGCs分化过程中lin28调节Blimp1表达的方法，属于生物技术领域。本发明将Lin28通过micRNA‑let7间接调控PGCs标记基因Blimp1的研究扩展到家禽领域，并准确定位到gga‑let‑7a‑2‑3p上，刷新了不同物种的Lin28‑let7‑Blimp1调节链的功能范畴。本方法简单易行，思路清晰，操作可行性高，在普通研究室就能完成。
分化过程生物技术领域标记基因功能范畴间接调控准确定位研究家禽物种清晰

[实用新型]小猪保定架-CN201720609312.1有效
发明人：喻礼怀;王淑楠;董丽;霍永久;彭众;毛俊舟;仲召鑫;姜景译 -专利权人：扬州大学
申请日： 2017-05-27 - 公布日： 2018-07-17 - 主分类号： A61D3/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种小猪保定架，包括上滚动轴承、下滚动轴承、支撑轴、底座支架、悬挂架、保定桶，支撑轴的底端固定在底座支架上，上滚动轴承套设在支撑轴的上部，下滚动轴承套设在支撑轴的下部，下滚动轴承沿东西南北四个方位设置有四个悬挂架，悬挂架的一端固定在下滚动轴承上，悬挂架的另一端设置有保定桶；保定桶由上U型架、下U型架、圆弧形侧板、保定桶门、保定桶底组成，本实用新型使小猪免受伤害，提高了工作效率。
滚动轴承悬挂架支撑轴小猪本实用新型滚动轴承套底座支架圆弧形侧板方位设置工作效率一端设置底端桶门伤害

[实用新型]一种林间养鸡的鸡舍装置-CN201720903601.2有效
发明人：冀德君;姜景译;姜西龙;黄强 -专利权人：扬州大学
申请日： 2017-07-25 - 公布日： 2018-05-01 - 主分类号： A01K31/00 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种林间养鸡的鸡舍装置，为组装式环形鸡舍，包括笼底座、侧笼栅板、前笼栅板、后笼栅板、笼后盖门、笼前盖门、隔板、产蛋区、活动区、喂食盘和接粪盘；拼装成圆形的围栏通过侧笼栅板、前笼栅板、后笼栅板拼装成圆形的围栏，在鸡舍中间设有圆形支柱，鸡舍顶部通过六块可移动的扇形铁盖拼装；鸡舍采用铁丝网制作底部，形成笼底座，在铁丝网下面设置有若干个V形的小型排水槽；在鸡舍内，通过隔板把产蛋区与活动区隔开，在产蛋区与活动区两区域之间设置间隔门和监测装置；在鸡舍内部的围栏墙壁上安置可让鸡飞翔的环形梯子。本实用新型可便捷的拆装、移动，更好的利用土地资源和鸡粪资源，让鸡舍回归自然，可观测鸡的生长。
一种林间养鸡鸡舍装置

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