本发明公开一种用于检测牛结节性皮肤病的竞争ELISA抗体检测试剂盒及制备方法。本发明的试剂盒包括:包被有GTPV‑ORF117编码的抗原蛋白的酶标板,竞争抗体,酶标二抗,样品稀释液,洗涤液,显色底物,及终止液等。本发明的检测试剂盒制备方法是:以提取的山羊痘病毒GTPV基因组DNA为模板,以SEQ ID No.1和SEQIDNo.2为引物扩增得到ORF117胞外区扩增片段,将扩增片段构建到原核表达载体pET‑30a中,表达质粒转化BL21(DE3)感受态,诱导表达获得ORF117胞外区重组蛋白,并将其包被于酶标板上封闭;以ORF117胞外区重组蛋白免疫兔,收集抗ORF117蛋白兔血清制备竞争抗体。本发明具有制备方便,价格低廉,不影响诊断的效率,诊断制剂成本低的优点,可以满足我国现阶段LSD感染、爆发、防控的需求。