本发明公开了一种针对EB病毒gB抗原的中和性单克隆抗体及其应用,所述抗体包括重链可变区和轻链可变区;所述重链可变区,包括SEQ ID NO:15所示的重链CDR‑H1;SEQ ID NO:16所示的重链CDR‑H2;和SEQ ID NO:17所示的重链CDR‑H3;所述轻链可变区,包括SEQ ID NO:18所示的轻链CDR‑L1;SEQ IDNO:19所示的轻链CDR‑L2;和SEQ ID NO:20所示的轻链CDR‑L3。本发明中的抗体能够特异性识别EB病毒gB抗原,且具有较好的中和效果,从而可以基于该抗体开发各类表达载体和转化体,从而有效用于EB病毒的检测、预防和治疗。