本申请涉及一种高产丁二酸的重组大肠杆菌及其构建方法和应用。所述重组大肠杆菌是通过将大肠杆菌中iscS基因的启动子和RBS分别替换为pJ23119和RBS34得到，所述pJ23119和所述RBS34的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本申请采用CRISPR‑cas9基因编辑技术过量表达大肠杆菌iscS基因，通过将重组大肠杆菌中iscS的启动子和RBS分别替换为pJ23119和RBS34，更高表达强度的iscS能够促进硫化氢的产生，有助于维持大肠杆菌在厌氧条件下的细胞生长和存活，同时有利于丁二酸的积累。
本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种莽草酸脱氢酶突变体、基因、表达载体、重组菌和应用，所述突变体是在SEQ ID NO.1所示的莽草酸脱氢酶序列的基础上，第61位、第241位的氨基酸中的一个或多个进行突变后得到；且所述莽草酸脱氢酶突变体相对于未突变的莽草酸脱氢酶，在生产莽草酸上，具有更高的效率；本发明减弱对莽草酸的逆向催化，提高莽草酸合成，减少副产物3‑脱氢莽草酸积累。
