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[发明专利]一种改良高温碱性蛋白酶AprThc的稳定性的方法及突变体-CN202311159462.3在审
发明人：黄火清;徐欣欣;罗会颖;田健;王苑;柏映国;张红莲;刘波;杨浩萌;于会民;姚斌 -专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
申请日： 2023-09-11 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N9/52 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种改良高温碱性蛋白酶AprThc的稳定性的方法及突变体。本申请对碱性蛋白酶AprThc进行L362I、K211G和/或R173G突变。本申请对高温碱性蛋白酶AprThc进行分子改良，以提升其热稳定性和pH稳定性，对于提升蛋白酶的综合性能，降低蛋白酶的使用成本具有重要意义，为蛋白酶的性质改良提供了有效的技术方法。
一种改良高温碱性蛋白酶 aprthc 稳定性方法突变体

[发明专利]一种提高高温碱性蛋白酶AprThc的表达量的方法及突变体-CN202311159482.0在审
发明人：黄火清;徐欣欣;罗会颖;田健;王苑;柏映国;张红莲;刘波;杨浩萌;于会民;姚斌 -专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
申请日： 2023-09-11 - 公布日： 2023-10-17 - 主分类号： C12N9/52 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种提高高温碱性蛋白酶AprThc的表达量的方法及突变体。本申请对高温碱性蛋白酶AprThc进行S105A、I151V、I297T或F366Y突变，对高温碱性蛋白酶AprThc进行表达量的提升，对降低蛋白酶的使用成本具有重要意义，为蛋白酶的性质改良提供了有效的技术方法。
一种提高高温碱性蛋白酶 aprthc 表达方法突变体

[发明专利]提高锰过氧化物酶的酶活力及过氧化氢耐受性的方法及突变体、编码基因和应用-CN202310706040.7有效
发明人：涂涛;刘晓青;王鑫源;罗会颖;姚斌;黄火清;柏映国;王亚茹;王苑;张杰;秦星;王晓璐;苏小运;张红莲;于会民 -专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
申请日： 2023-06-15 - 公布日： 2023-10-17 - 主分类号： C12N9/08 文献下载
摘要：本发明涉及农业生物技术领域，具体地涉及提高锰过氧化物酶的酶活力及过氧化氢耐受性的方法及突变体、编码基因和应用。本发明以来源于Moniliophthora roreri的锰过氧化物酶MrMnP作为母本，获得催化效率和H2O2耐受性提高的锰过氧化物酶MrMnP1。涉及到的氨基酸突变点为Glu148Gly。改造后的锰过氧化物酶MrMnP1酶活由10.43 U/mg提高到了13.83 U/mg，提高幅度为32.7%；在1.5 mM H2O2下，MrMnP1酶活由4.3 U/mg提高到了8.3 U/mg，提高幅度为92.7%；在1.5 mM H2O2下处理30 min后，MrMnP1剩余酶活由0.13 U/mg提高到了1.53 U/mg，提高幅度为1067%。
提高过氧化物活力过氧化氢耐受方法突变体编码基因应用

[发明专利]一种提高碱性蛋白酶热稳定性的方法及突变体ThAPT3-M6、M7、M8、M9和应用-CN202310199723.8在审
发明人：秦星;王宵;罗会颖;姚斌;王亚茹;黄火清;柏映国;苏小运;王苑;涂涛;张杰;王晓璐;张红莲;于会民 -专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
申请日： 2023-03-05 - 公布日： 2023-09-29 - 主分类号： C12N9/58 文献下载
摘要：发明涉及基因工程和蛋白质工程领域，具体涉及一种提高碱性蛋白酶热稳定性的方法及突变体ThAPT3‑M6、7、8、9和应用。本发明以碱性蛋白酶PA3为亲本，分别将loop18区域优化后的突变体ThAPT3‑M2、α8‑helix区域优化后的突变体ThAPT3‑M4和loop19区域优化后的突变体ThAPT3‑M5分别进行双区域叠加和三区域叠加，产生了四个突变体。突变体的Tm值提高了7.2℃、4.3℃、5.7℃、7.5℃，55℃下的t1/2分别提高到亲本的10.6倍、6.9倍、8.5倍、12.2倍，60℃下的t1/2分别提高到亲本的21.2倍、13.2倍、17.6倍、39.7倍。突变体M6、M7、M8和M9的比活力相较于亲本分别提高了23％、25％、20％和62％。因此，本发明提供的碱性蛋白酶突变体相较于野生型有着更好的热稳定性和催化活性，具有更好的工业应用前景。
一种提高碱性蛋白酶热稳定性方法突变体 thapt3 m6 m7 m8 m9 应用

[发明专利]构建以果糖、甘油和CO2-CN202310334319.7在审
发明人：王晓璐;张杰;姚斌;罗会颖;黄火清;柏映国;苏小运;涂涛;张红莲;王苑;王亚茹;秦星;于会民 -专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
申请日： 2023-03-31 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及构建以果糖、甘油和CO2为碳源生产N‑乙酰氨基葡萄糖的罗尔斯通氏菌工程菌的方法。本发明通过敲除罗尔斯通氏菌H16中的nagC、nagE、nagF、nagA和nagB基因来阻断N‑乙酰氨基葡萄糖进入细胞及其在细胞内的分解代谢途径。而后，通过异源表达秀丽隐杆线虫来源的葡萄糖胺‑6‑磷酸N‑乙酰基转移酶突变体基因(Cegna1*)构建了N‑乙酰氨基葡萄糖生产菌株。进一步通过阻断ED途径和聚羟基丁酸酯(PHB)合成途径，进一步提高了N‑乙酰氨基葡萄糖的产量。以果糖、甘油和CO2为唯一碳源进行发酵，N‑乙酰氨基葡萄糖的最高产量分别达到了199.9、566.3和75.3mg/L，不但能够实现生物活性物质的合成，同时也消除大气中的温室气体。
构建果糖甘油 co base sub

[发明专利]一种构建高产γ-氨基丁酸重组大肠杆菌的方法及生产γ-氨基丁酸的方法-CN202310337105.5在审
发明人：王晓璐;常放放;张杰;涂涛;姚斌;罗会颖;黄火清;柏映国;苏小运;张红莲;秦星;王苑;王亚茹;于会民 -专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
申请日： 2023-03-31 - 公布日： 2023-08-04 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及一种构建高产γ‑氨基丁酸重组大肠杆菌的方法及生产γ‑氨基丁酸的方法。本发明通过在大肠杆菌中异源表达芽孢杆菌Z11来源的谷氨酸脱羧酶编码基因构建了一株能够进行γ‑氨基丁酸生产的大肠杆菌工程菌株。为消除大肠杆菌工程菌在转化底物生产γ‑氨基丁酸的过程中对外源昂贵辅因子吡哆醛5’‑磷酸的依赖，通过对基因来源、基因组合及表达调控方式进行筛选，在上述大肠杆菌工程菌株中构建了内源吡哆醛5’‑磷酸的合成途径。该途径的构建不但能够完全供给谷氨酸脱羧酶的辅酶需求，而且大幅提升了产物的转化效率。
一种构建高产氨基丁酸重组大肠杆菌方法生产

[发明专利]一种具有高水解稳定性的酯型变压器油组合物-CN202210037890.8在审
发明人：王俊明;王会娟;李团乐;张建荣;于会民;马书杰;汪利平 -专利权人：中国石油天然气股份有限公司
申请日： 2022-01-13 - 公布日： 2023-07-25 - 主分类号： C10M169/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种具有高水解稳定性的酯型变压器油组合物，所述酯型变压器油组合物包含：99.5至99.7重量百分比的具有19～35mm2/s 40℃运动黏度的多元醇酯基础油；0.1至0.4重量百分比的抗氧剂；0.0001至0.01重量百分比的水解抑制剂；0.00001至0.0001重量百分比的腐蚀抑制剂；其中所有重量百分比均基于所述组合物的总重量，本发明涉及变压器油技术领域。该具有高水解稳定性的酯型变压器油组合物，在优选酯类基础油结构和控制精制深度的同时，并在不影响酯型变压器油电气绝缘性能的前提下，通过水解抑制剂的引入，大幅提升了酯型变压器油的水解稳定性，克服了传统酯型变压器油在长期应用过程中易发生水解的缺点，且该酯型变压器油组合物电气绝缘性能优越。
一种具有水解稳定性变压器组合

[发明专利]一种变压器油局部过热条件下产气特性的模拟装置和方法-CN202210027124.3在审
发明人：王会娟;陈华;马书杰;于会民;张昱;韩建智;张绮;张占库;张海 -专利权人：中国石油天然气股份有限公司
申请日： 2022-01-11 - 公布日： 2023-07-21 - 主分类号： G01N25/00 文献下载
摘要：本发明提供一种变压器油局部过热条件下产气特性的模拟装置和方法。本发明第一方面提供一种变压器油局部过热条件下产气特性的模拟装置，所述装置包括变压器油存储单元、循环单元以及过热单元，通过循环单元和过热单元，将密封存储在变压器油存储单元内的部分变压器油输入至过热单元进行过热处理，并返回至变压器油存储单元内进行冷却，以此为循环，对循环后的变压器油进行溶解气检测，充分模拟了变压器油的实际局部过热运行工况，解决了目前变压器油在局部过热条件下产气特性的模拟结果与实际情况存在偏差的问题。
一种变压器局部过热条件下特性模拟装置方法

[实用新型]一种液压断路装置及水下作业装置-CN202320292707.9有效
发明人：张定华;于会民;王鸿飞;姜海雨;曹刚;孙谦;胡佩宝;刘宏林;丁洁;孙古津;王洪伟;李修波 -专利权人：上海中车艾森迪海洋装备有限公司
申请日： 2023-02-22 - 公布日： 2023-07-21 - 主分类号： F15B21/00 文献下载
摘要：本实用新型属于水下作业技术领域，具体是涉及到一种液压断路装置及水下作业装置，包括液压接头、基座和压板，液压接头包括公接头和母接头，所述母接头包括母接头本体和卡套，所述母接头本体和卡套中的其中一个与基座固定，另一个与压板固定，朝基座的方向推动压板时，母接头和卡套在轴向上产生相对位移，本实用新型操作便捷，对机械臂的灵活度要求低，仅需潜水器标配的机械臂按压操作即可完成油路的断开，避免因潜水器连接的作业工具卡滞而导致潜水器无法回收的问题，不会对液压管路造成损坏，避免液压系统的泄露和污染。整体结构简单，便于维护，适用性强，能够适用于各种通过液压接头连接的液压系统。
一种液压断路装置水下作业

[发明专利]一种研究油纸复合绝缘在电热复合应力下产气趋势的装置及方法-CN202111623341.0在审
发明人：王会娟;马书杰;于会民;陈华;张昱;王鹏;张绮 -专利权人：中国石油天然气股份有限公司
申请日： 2021-12-28 - 公布日： 2023-06-30 - 主分类号： G01R31/62 文献下载
摘要：本发明涉及一种研究油纸复合绝缘在电热复合应力下产气趋势的装置，包括：电极杯、高压电源、抽真空装置和循环泵，电极杯包括：圆筒状杯体，设有电极杯上盖和电极杯下盖，电极杯上盖设有真空快速接头、注射器接口和出油管线，电极杯下盖上设有进油管线和接地线；电极，包括内电极和外电极，内电极为空心圆柱状，设于杯体内部，上顶面设有高压接线柱，高压接线柱穿过电极杯上盖并与电极杯上盖固定密封连接；外电极镶嵌于杯体侧壁内表面且底部超出杯体下缘与电极杯下盖接触；固体绝缘层，紧密贴合在外电极表面；加热装置，加热装置设于杯体上；高压电源与高压电极连接杆连接；抽真空装置与真空快速接头连接；循环泵与进油管线和出油管线连接。
一种研究油纸复合绝缘电热应力下产气趋势装置方法

[发明专利]一种最适温度、热稳定性和自降解抗性提高的碱性蛋白酶突变体ThAPT3-M10及应用-CN202310177937.5在审
发明人：罗会颖;王宵;秦星;王晓路;黄火清;涂涛;苏小运;张杰;柏映国;王苑;张红莲;田健;王亚茹;于会民;姚斌 -专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
申请日： 2023-02-28 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： C12N9/50 文献下载
摘要：本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及一种最适温度、热稳定性和自降解抗性提高的碱性蛋白酶突变体ThAPT3‑M10及应用。本发明以碱性蛋白酶ThAPT3‑M9为亲本，在表面loop区域的以定点突变的方法引入三个突变位点，突变体ThAPT3‑M10的最适温度从65℃提高到了70℃。Tm值与亲本相比提高了3℃，60℃下的t1/2从62.4min提高到了111.8min(≈1.8倍)。此外，ThAPT3‑M10在70℃下的自降解现象较亲本相比有了明显的改善。因此，本发明提供的碱性蛋白酶突变体相较于亲本有着更好的热稳定性和自降解抗性，具有更好的工业应用前景。
一种温度热稳定性降解抗性提高碱性蛋白酶突变体 thapt3 m10 应用

[发明专利]改良中性甘露聚糖酶PLM5A的稳定性的方法及突变体-CN202310378038.1在审
发明人：黄火清;徐欣欣;罗会颖;王苑;张红莲;杨浩萌;柏映国;涂涛;苏小运;姚斌;于会民 -专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
申请日： 2023-04-11 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： C12N9/24 文献下载
摘要：本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及改良中性甘露聚糖酶PLM5A稳定性的方法及突变体。本申请对中性甘露聚糖酶PLM5A进行K52V、T266D、W291S、A93LK205R、F63Y、D66Y、S283L、G288S和/或L292I突变。突变体的最适温度提高，热稳定性增加，具有更强的耐酸性。
改良中性甘露聚糖 plm5a 稳定性方法突变体

[发明专利]具有高比活力的耐热α-淀粉酶突变体及其基因和应用-CN202310031075.5在审
发明人：涂涛;廖敏;罗会颖;姚斌;黄火清;柏映国;王苑;苏小运;王亚茹;张杰;秦星;王晓璐;张红莲;于会民 -专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
申请日： 2023-01-10 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N9/28 文献下载
摘要：本发明涉及农业生物技术领域，具体地，本发明涉及具有高比活力的耐热α‑淀粉酶突变体及其基因和应用。本发明通过将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的突变体α‑淀粉酶K152H/A166C/E168H(M1)进行A262D单点突变，从而获得所述α‑淀粉酶的突变体。本发明的α‑淀粉酶突变体与α‑淀粉酶M1相比，比活力大幅提升，且最适温度不变，为95℃。
具有活力耐热淀粉酶突变体及其基因应用

[发明专利]一种提高碱性蛋白酶热稳定性的方法及突变体ThAPT3-M1、ThAPT3-M2和应用-CN202310199721.9在审
发明人：罗会颖;王宵;秦星;姚斌;王亚茹;黄火清;柏映国;苏小运;王苑;涂涛;张杰;王晓璐;张红莲;于会民 -专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
申请日： 2023-03-05 - 公布日： 2023-06-06 - 主分类号： C12N9/58 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程和蛋白质工程领域。具体地，涉及到一种提高碱性蛋白酶热稳定性的方法及突变体ThAPT3‑M1、ThAPT3‑M2和应用。本发明以碱性蛋白酶PA3为亲本，通过区段替换和定点突变，从而获得了热稳定性显著提高的蛋白酶突变体。亲本PA3在60℃条件下处理10min和20min后，剩余酶活分别为1.9％和1.6％。突变体ThAPT3‑M1和ThAPT3‑M2在60℃下处理10min后，剩余酶活分别为62％和69％；突变体ThAPT3‑M1和ThAPT3‑M2在60℃下处理20min后，剩余酶活分别为39％和43％。此外，突变体ThAPT3‑M2的比活力提高了25％。因此，本发明提供的碱性蛋白酶突变体相较于野生型有着更好的热稳定性和催化活性，具有更好的工业应用前景。
一种提高碱性蛋白酶热稳定性方法突变体 thapt3 m1 m2 应用

[发明专利]一种提高碱性蛋白酶热稳定性的方法及突变体ThAPT3-M5和应用-CN202310199724.2在审
发明人：张红莲;王宵;罗会颖;秦星;姚斌;王亚茹;黄火清;柏映国;苏小运;王苑;涂涛;张杰;王晓璐;于会民 -专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
申请日： 2023-03-05 - 公布日： 2023-06-06 - 主分类号： C12N9/58 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程和蛋白质工程领域。具体地，涉及到一种提高碱性蛋白酶热稳定性的方法及突变体ThAPT3‑M5和应用。本发明以碱性蛋白酶PA3为亲本，获得了热稳定性显著提高的蛋白酶突变体ThAPT3‑M5。亲本PA3的Tm值为68.2±0.3℃，而突变体的Tm值提高到了69.5±0.2℃。突变体在55℃和60℃下的t1/2分别提高到亲本的2.3倍和2.8倍。在60℃下处理10min后，亲本剩余酶活为1.9％，而突变体M5的剩余酶活为34.9％。此外，突变体的比活力从最初的3078.3±82.5U/mg提高到了3701.9±42.5U/mg。因此，本发明提供的碱性蛋白酶突变体相较于野生型有着更好的热稳定性和催化活性，具有更好的工业应用前景。
一种提高碱性蛋白酶热稳定性方法突变体 thapt3 m5 应用

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