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[发明专利]一种高效产春雷霉素的小金色链霉菌诱变和筛选方法-CN201811609554.6在审
发明人：高嫚妮;吴亮亮;李昶志;郑鹏飞;杨宏勃;潘忠成;李蒲民 -专利权人：陕西麦可罗生物科技有限公司
申请日： 2018-12-27 - 公布日： 2019-04-12 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种高效产春雷霉素的小金色链霉菌诱变和筛选方法，属于微生物技术领域。本发明利用新型等压室温等离子体（ARTP）育种系统诱变春雷霉素产生菌株，主要包括以下步骤：（1）小金色链霉菌斜面培养和斜面孢子计数；（2）孢子悬液制备；（3）小金色链霉菌常压室温等离子体（ARTP）诱变处理；（4）春雷霉素高产菌株筛选。该方法筛选的小金色链霉菌摇瓶发酵最高效价可达5091μg/mL，相比原始出发菌株效价提高了130%，应用到工业生产中，具有重要的经济价值。
小金色链霉菌春雷霉素筛选诱变等离子体效价微生物技术领域原始出发菌株孢子悬液制备等压产生菌株高产菌株斜面培养斜面孢子摇瓶发酵诱变处理育种系统常压应用

[发明专利]一种提高电能诱导活细胞膜电穿孔效率的方法-CN201811634056.7在审
发明人：殷胜勇;刘振;闫克平;郑树森 -专利权人：浙江大学
申请日： 2018-12-29 - 公布日： 2019-04-09 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明利用传输线将电容中储藏的电能，以指数波形纳秒电脉冲释放到等渗生理盐溶液中，导致其中活细胞的细胞膜发生电穿孔。当等渗生理盐溶液阻抗高于传输线特性阻抗时，因电荷在传输线中反射，释放到负载的电脉冲的电压高于电容器放电起始点加载的电压，使得电容中存储的同样单脉冲能量释放到悬浮在等渗生理盐溶液中活细胞时，脉冲的电压最高峰值更高，从而提高诱导活细胞发生功能电穿孔的效率。输出更少的总能量就能诱导更高比例的活细胞出现细胞膜电穿孔。
电穿孔活细胞细胞膜生理盐溶液等渗传输线诱导电容电脉冲释放传输线特性阻抗单脉冲能量电容器放电指数波形电荷起始点总能量脉冲加载阻抗反射悬浮存储输出

[发明专利]基于高磁场重力环境的产胶原蛋白酵母菌诱变方法-CN201710859961.1在审
发明人：杨树林;于洋;金明杰 -专利权人：南京理工大学
申请日： 2017-09-21 - 公布日： 2019-03-29 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于高磁场重力环境的产胶原蛋白酵母菌诱变方法，利用地面模拟装置产生的高磁场重力环境对产胶原蛋白酵母菌进行诱变。所述方法先将对数生长期的产胶原蛋白酵母菌菌株置于高磁场重力环境下，磁感应密度为12～16T，重力水平为0～2g，诱变时间为24～72h，得到诱变菌株，再将诱变菌株涂布固体培养基，挑取生长旺盛的单菌落接种于液体培养基摇瓶发酵，以胶原蛋白产量为检测标准，得到高胶原蛋白产量菌株。本发明的利用地面模拟装置产生的高磁场重力环境诱变方法，操作简便、效率较高、筛选效果较好、对环境无污染，并解除了菌株对常规物理和化学诱变方法的疲劳效应。
胶原蛋白重力环境高磁场诱变酵母菌地面模拟装置诱变菌株对数生长期固体培养基环境无污染酵母菌菌株液体培养基产量菌株常规物理化学诱变疲劳效应摇瓶发酵重力水平磁感应单菌落原蛋白高胶菌株接种筛选生长检测

[发明专利]使用等离子体在植物细胞内导入物质的方法-CN201780044597.1在审
发明人：光原一朗;柳川由纪;冲野晃俊;宫原秀一;川野浩明;小林智裕;渡边洋辅 -专利权人：国立研究开发法人农业·食品产业技术综合研究机构;国立大学法人东京工业大学
申请日： 2017-06-08 - 公布日： 2019-03-15 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：发现了通过将植物细胞用等离子体处理后，与物质接触，从而无论该细胞的来源植物和组织的种类如何，都能够对该细胞简便且高效率地导入物质，并且不引起损伤。
植物细胞等离子体等离子体处理细胞方法发现来源植物物质接触高效率损伤

[发明专利]一种高产雷帕霉素链霉菌的选育方法-CN201811285500.9在审
发明人：朱辉;曹艳茹;莫洪;张翠英;邓涛;庞雪;韩晓彤;石蕊 -专利权人：成都雅途生物技术有限公司
申请日： 2018-10-31 - 公布日： 2019-02-12 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明属于生物工程领域，公开了一种高产雷帕霉素链霉菌的选育方法，针对现有技术中高产雷帕霉素链霉菌的选育方法中存在的诱变方法随机、方向不易掌握、理想个体筛选困难的问题，本发明的技术方案是：以常温常压等离子体(ARTP)/紫外复合诱变，并进行链霉素抗性突变选育，筛选出产雷帕霉素水平高的菌种。方法涉及ARTP/紫外诱变的复合诱变及链霉素抗性筛选，包括起始菌株的筛选、菌种诱变和摇瓶培养。采用此复合诱变和抗性筛选相结合的方法获得的优良菌种，遗传稳定性较好。
雷帕霉素复合诱变链霉菌筛选链霉素抗性高产菌种等离子体生物工程领域遗传稳定性常温常压菌种诱变抗性筛选起始菌株摇瓶培养紫外诱变诱变突变

[发明专利]一种促进细胞激活和分化的方法-CN201510516063.7有效
发明人：吴剑波;罗茂 -专利权人：吴剑波
申请日： 2015-08-20 - 公布日： 2019-02-12 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种促进细胞激活和分化的方法，其特征在于：它是采用细胞治疗转化仪处理，包括如下步骤：(1)取细胞，置于针筒中，然后将针筒放入通道(7)中；(2)打开LED光源和仪器启动键(10)，光照10‑20min，即可。本发明方法利用红、绿、黄3种特定波段LED光源组合辐射，高效率诱导细胞活化，促进细胞生长，其适用于人或动物富含血小板血浆(PRP)、干细胞、上皮细胞等再生转化，临床应用前景良好。
一种促进细胞激活分化方法

[发明专利]一种提高宿主细胞产酶活性的方法-CN201410741535.4有效
发明人：赵三军;赵敏 -专利权人：云南师范大学
申请日： 2014-12-09 - 公布日： 2019-01-25 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明涉及农业、食品、医药卫生及环境工程行业中利用宿主细胞生产各类酶制品制剂的技术领域，具体涉及一种提高宿主细胞产酶活性的方法，它采用如下的技术方案：先采用摇瓶培养，在1 m³发酵罐培养发酵培养基，培养结束后采用对发酵菌及酶液施加直流电压0.1‑5V/cm，直流电流1‑120分钟；它在发酵工程细胞的产酶的过程中，对发酵产生的细胞及酶液混合物应用直流电场刺激，可明显提高细胞产酶活力20%～30%，且操作工艺简单，可控性强，适宜于大批量发酵生产，可有效降低应用细胞工程生产饲料、食品、医药卫生等工业用酶的生产成本，节约能源和资源，社会经济效益显著，符合国家关于发酵工业节能降耗的绿色发展趋势。
一种提高宿主细胞活性方法

[发明专利]一种高产维生素B12的突变菌株制备方法-CN201811109813.9在审
发明人：韩龙;马杰希;阮国祥;陈凯庆 -专利权人：山东泓达生物科技有限公司
申请日： 2018-09-21 - 公布日： 2019-01-15 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明属于生物工程中的菌种制备技术领域，涉及一株高产维生素B12成分的突变菌株及工业发酵技术,特别是一种高产维生素的突变菌株的生产培育方法；涉及的脱氮假单胞菌的具体诱变工艺步骤包括：出发菌悬液制备、诱变、菌落计数、菌株初筛和菌株复筛；其通过对原始菌株进行诱变后，再次通过常温常压等离子体（ARTP）诱变技术对一株具有典型诱变特征的菌株进行了诱变，最终获得遗传性质稳定、发酵水平较高的菌种；涉及的突变菌株TP‑121实现工业发酵生产维生素B12的方法包括如下步骤：种瓶制备、种子罐培养和发酵罐培养；其工艺原理可靠，操作步骤简单，技术条件成熟，菌种优质，维生素产量高，应用环境友好。
诱变维生素突变菌株菌株高产菌种制备等离子体工业发酵技术脱氮假单胞菌发酵罐培养种子罐培养常温常压发酵水平工业发酵工艺步骤工艺原理技术条件菌种制备悬液制备遗传性质应用环境原始菌株出发菌菌落初筛复筛生物工程生产成熟培育

[发明专利]一种低能N+离子注入诱变长柄木霉高产蛋白酶的方法-CN201811010797.8在审
发明人：徐双贵;胡培;李垒 -专利权人：安徽省新康饲料有限公司
申请日： 2018-08-31 - 公布日： 2019-01-08 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种低能N+离子注入诱变长柄木霉高产蛋白酶的方法，涉及生物工程技术领域。包括：将原产酸性蛋白酶的长柄木霉菌株接种在固体发酵平板培养基上；取平板培养基上的长柄木霉菌株利用稀释分离法进行分离纯化；用接种环取在斜面培养基上取长柄木霉孢子，加入无菌水中进行稀释；取孢子悬液均匀涂布于空的无菌培养皿中，然后放入离子注入机的靶室进行离子注入；选取生长状况良好的菌株接种到种子培养基上；将上述选取的菌株接种至发酵液培养基中进行培养。本发明通过不同的营养培养基进行多次培养及分离提纯，同时还使用低能氮离子注入，提高了长柄木霉的酸性蛋白酶的产量，同时获得酸性蛋白酶还具有耐高温性能。
长柄木霉酸性蛋白酶离子蛋白酶平板培养基菌株接种木霉菌株长柄诱变生物工程技术领域发酵液培养基高产离子注入机耐高温性能无菌培养皿稀释分离法斜面培养基营养培养基种子培养基分离纯化分离提纯固体发酵均匀涂布生长状况孢子悬液氮离子接种环孢子靶室放入水中无菌稀释接种

[发明专利]利用由物理刺激引起的环境流入的细胞重编程方法-CN201680084450.0在审
发明人：金舜学 -专利权人：斯特昂株式会社
申请日： 2016-08-09 - 公布日： 2018-12-25 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明涉及利用由物理刺激引起的环境流入的细胞重编程方法，更具体地，在没有引入来自分化细胞的反分化的诱导因子及化学物质的情况下，通过向分化细胞或未分化细胞提供能够促进超声波处理、激光处理或热处理等的环境流入的、物理刺激来使细胞仅在外部环境的流入下重编程为多能细胞或分化细胞或与未分化细胞具有不同的表型的任意分化细胞，而且这种诱导的生产过程简单而有效，因此具有能够提高自体细胞治疗的可能性的效果。
分化细胞物理刺激未分化细胞细胞重编程超声波处理热处理多能细胞化学物质激光处理生产过程外部环境诱导因子自体细胞重编程表型诱导分化细胞引入治疗

[发明专利]细胞重编程装置-CN201680084455.3在审
发明人：金舜学 -专利权人：斯特昂株式会社
申请日： 2016-08-09 - 公布日： 2018-12-25 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明涉及利用能够促进环境流入的能量的细胞重编程装置，更具体地，具有如下效果：通过向分化的细胞施加超声波处理、激光处理或热处理等的能量来诱导具有多能特性的新型多能细胞或与上述分化的细胞具有不同的表型的任意分化细胞的重编程。
细胞重编程分化超声波处理热处理细胞多能细胞分化细胞激光处理重编程表型诱导施加

[发明专利]一种通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法-CN201811200195.9在审
发明人：赵一楠;涂顺根;胡志远;郭文;徐思;郭志坚;六成;吴建;于海庆;张世军;贾云星;郭明春 -专利权人：内蒙古格林特制药有限责任公司
申请日： 2018-10-16 - 公布日： 2018-12-21 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法，首先把选取好的菌落用玻璃珠打碎，制成孢子悬液，从中吸取单孢子悬液1ml稀释作对照，另取滤液加入双碟中，其中双碟有事先配制好的含有硫酸二乙酯的培养基；用紫外线均匀照射30min，用黑布罩住，用无菌水稀释后，均匀涂布于平皿，形成单菌落，移入恒温箱中培养，8天后菌落长好，挑取分生孢子单菌落接入斜面培养8天；成熟后的菌落接入摇瓶进行初筛，选取效价单位高于出发菌种3％的10个斜面，转接斜面，培养成熟后，再进行摇瓶复筛；选取复筛后单位较高的5个斜面，将对应编号的斜面埋沙土，进行保藏。本发明能够进一步提高发酵单位，使菌种保持优良特性。
硫酸二乙酯菌种紫外线诱变灰黄霉素单菌落菌落稀释复筛摇瓶单孢子悬液保藏出发菌种发酵单位分生孢子均匀涂布均匀照射菌落接入斜面培养孢子悬液培养基转接玻璃珠恒温箱无菌水紫外线初筛黑布平皿效价移入罩住成熟沙土打碎配制

[发明专利]基于梯度稀释和恒电位培养的电活性菌分离纯化方法-CN201810621487.3在审
发明人：张少辉;陆俊佳;王科;钟留香;魏霞 -专利权人：武汉理工大学
申请日： 2018-06-15 - 公布日： 2018-11-23 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明属于分离纯化技术领域，具体涉及基于梯度稀释和恒电位培养的电活性菌分离纯化方法。所述方法为：构建电活性菌分离培养装置，采用无菌水对混培物梯度稀释，接种于漏斗形碳纸电极；外接恒电位仪构成外电路进行恒电位培养，当恒电位控制下电流值相对较高，且碳纸电极室内电子供体或电子受体去除效果良好时，更换碳纸电极室内的培养液，以定值电阻代替恒电位仪，在微生物燃料电池环境中培养分离物；取稀释倍数较高且代谢活性和电活性较佳的分离物，多次重复直至分离出纯化的电活性菌为止。本发明所述方法可用于阳极电活性菌和阴极电活性菌的分离。
电活性菌恒电位分离纯化碳纸电极梯度稀释恒电位仪分离物培养液微生物燃料电池阴极分离培养装置代谢活性电子受体定值电阻多次重复室内电子阳极电活性混培物漏斗形外电路无菌水供体构建可用外接稀释去除接种室内

[发明专利]脉冲电场联合碳纳米管在促进癌细胞凋亡中应用的方法-CN201810794317.5在审
发明人：章幼玉;汪斌;毛铮;陆楠;钟渊福;柳清伙 -专利权人：厦门大学
申请日： 2018-07-19 - 公布日： 2018-11-23 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：脉冲电场联合碳纳米管在促进癌细胞凋亡中应用的方法，涉及脉冲电场联合碳纳米管的应用。制备细胞悬浮液；配制三种碳纳米管的不同浓度去离子分散液；将碳纳米管去离子分散液与细胞悬浮液均匀混合，得到碳纳米管‑细胞悬浮液；取细胞悬浮液加入电极杯中设置空白对照组和纯电脉冲处理组；取碳纳米管‑细胞悬浮液加入电极杯中设置纯碳纳米管处理组和脉冲电场联合碳纳米管处理组；在电脉冲处理的实验组的电极杯正负极板施加脉冲电场；脉冲处理后，利用MTT法测定各处理组细胞存活率；脉冲处理后利用Annexin V‑FITC/PI双染法，通过流式细胞仪分析各处理组细胞凋亡情况；脉冲处理后利用克隆形成实验检测细胞生长增殖能力的变化。
碳纳米管细胞悬浮液脉冲电场脉冲处理电极杯分散液癌细胞凋亡离子联合应用电脉冲处理空白对照组流式细胞仪细胞存活率实验检测细胞凋亡细胞生长增殖能力正负极板纳米管实验组纯电纯碳制备配制克隆施加分析

[发明专利]一种用于光镊精品细胞进行融合包装的方法及装置-CN201810741236.9在审
发明人：林建铃 -专利权人：苏州美丽澄电子技术有限公司
申请日： 2018-07-08 - 公布日： 2018-11-20 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明提供一种用于光镊精品细胞进行融合包装的方法及装置，所述方法包括细胞群的选取、细胞的光镊提取、细胞膜的催化、细胞的融合及修复和异核细胞的保存，所述装置包括装置固定架、光辐射压力机和直流脉冲接头，所述装置固定架上通过螺栓连接有自调固定器，所述直流脉冲接头通过螺栓连接在自调固定器的顶部，所述自调固定器的一侧通过螺栓连接有电动震荡架，所述自调固定器的另一侧设有倾斜调节器，所述装置固定架的底部设有自调式水平底座，该用于光镊精品细胞进行融合包装的方法及装置设计新颖，结构合理，能够高精准度的将被研究细胞隔空镊取到催化皿中，避免损伤其细胞膜。
细胞固定器光镊螺栓连接装置固定细胞膜融合直流脉冲催化精品压力机光辐射倾斜调节器高精准度水平底座装置设计细胞隔细胞群震荡架自调式异核损伤修复保存研究