[发明专利]纤维蛋白原受体拮抗剂

说明书

本发明的背景

本发明一般涉及调节细胞粘连，并涉及抑制纤维蛋白原和其他蛋白质与血小板的结合，以及涉及抑制血小板的聚集，具体地讲是向IIb/IIIa纤维蛋白原受体位点的血小板的聚集。纤维蛋白原是一种存在于血浆中的糖蛋白，它参与血小板聚集并参与纤维蛋白的形成。血小板是细胞样除核的片段，可在所有哺乳动物的血液中发现，它也参与血液的凝结。已知纤维蛋白原与IIb/IIIa受体位点的相互作用对于正常的血小板功能是必需的。

当血管被损伤或被其他成因因子所损伤时，血小板就粘连到被破坏的内皮下(sub endothethial)表面。随后，该粘连的血小板释放生物活性成分并聚集起来。聚集是由激动剂例如凝血酶、肾上腺素或ADP与特定的血小板膜受体的结合引起的。激动剂的刺激导致潜在的纤维蛋白原受体在血小板表面的暴露，以及纤维蛋白原与糖蛋白IIb/IIIa受体复合物的结合。

人们已尝试过使用天然产物和合成肽来测定粘连与血小板聚集的机理。例如，Rouslahti和Pierschbacher在Science，238，491-497(1987)中描述了存在于细胞外基质和血液中的粘连蛋白质，例如纤维结合素、vitronectin、osteopontin、胶原蛋白、thrombospondin、纤维蛋白原和von Willebrand因子。所述蛋白质含有三肽精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)作为其糖蛋白IIb/IIIa识别位点。这些含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的三肽由至少一族结构上相关的受体整合素(integrin)中的一个成员识别，所述的整合素是具有两个跨膜亚单元的杂二聚体蛋白质。该作者阐明在各蛋白质中三肽序列的构型对于识别特异性来讲可能是关键的。

Cheresh于Proc.Nat′l Acad.Sci，U.S.A.，84，6471-6475(1987)中描述了由人内皮细胞表达的Arg-Gly-Asp主导的粘连受体，它在结构上类似于在血小板上的IIb/IIIa复合物，但在抗原上和功能上不同。这种受体直接包含在与纤维蛋白原、von Willebrand因子和vitronectin粘连的内皮细胞中。

Pierschbacher和Rouslahti于J.of Biol.Chem.，262，(36)，17294-17298(1987)中假设，Arg-Gly-Asp序列单独就是受体识别和结合的足够的信号，并因此使三肽序列的构型是可测量的。制得了各种合成肽，该作者断定，由向此序列的对映体取代或加成所影响的Arg-Gly-Asp的立体化学构型显著地影响了受体-配体的相互作用。该作者还说明，通过在非末端残基Pen与Cys之间形成一个二硫化物桥产生的十肽环化，使得该肽在抑制与纤维结合素的粘连方面的效果极其低。

在Proc.Nat′l Acad.Sci.U.S.A.81，5985-5988(1984)中，相同的作者描述了纤维结合素的细胞识别位点的四肽变体，它保持着促进粘连的活性。具有一个四肽识别位点的肽类描述于美国专利4,589,881和4,614,517中。在纤维结合素的细胞结合区的许多大的多肽片段具有细胞粘连活性。例如参见美国专利4,517,686、4,661,111和美国专利4,578,079。

Ruggeri等人，于Proc.Nat′l Acad.Sci.U.S.A.83，5708-5712(1986)中探索了一系列设计成长度为16个残基的合成肽，它含有抑制纤维蛋白原与血小板结合的、与RGD的天冬氨酸残基连着的RGD和缬氨酸。也可参见Koczewiak等人，Biochem.23，1767-1774(1984)；Ginsberg等人，J.Biol.Chem.，260(7)，3931-3936(1985)；和Haverstick等人，Blood 66(4)，946-952(1985)。其他抑制剂公开于欧洲专利申请号275,748和298,820中。