[发明专利]羊栖菜分段多糖的制备方法及其在制备抗RSV药物中的应用

说明书

本发明涉及医药技术领域，提供羊栖菜分段多糖的制备方法及其在制备抗RSV药物中的应用。羊栖菜分段多糖由以下步骤制得：(1)羊栖菜粗多糖的制备；(2)中间产物的制备；(3)羊栖菜多糖的制备；(4)将羊栖菜多糖溶于溶剂中，上清液经过不同分子截留板后，再进行冷冻干燥，即得对应分子量的羊栖菜分段多糖。本发明制备的羊栖菜分段多糖对RSV有显著的抑制作用，其药物抑毒指数(TI)可达4000以上。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及羊栖菜分段多糖的制备方法及其在制备抗RSV药物中的应用。

背景技术

羊栖菜，褐藻门马尾藻科马尾藻属植物，又称为六角菜、海大麦、玉海草等，其藻体呈黄褐色，是中药“海藻”的主要植物来源之一。我国海藻资源丰富,其营养和药用价值较高且形态差异较大，成熟羊栖菜株高30～50cm。羊栖菜的产地主要分布在我国渤海(如辽宁)、东南沿海(如浙江、福建)、黄海(如山东)等暖温带海域，在日本、韩国、朝鲜等国也有一定分布。羊栖菜味苦、咸、寒，具有坚软散结、利水消肿、泻热化痰等功效，在中医临床上常用于治疗瘰疬、睾丸肿痛、痰饮水肿等疾病。

羊栖菜藻体的主要化学成分为羊栖菜多糖，占干藻体物质的50％以上，现代药理实验表明，羊栖菜多糖具有抗氧化、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤、抗病毒、抑菌、降血糖及促进生长发育等生物活性。羊栖菜多糖是一类组成结构相似的酸性多糖混合物,分子量大多在3500kDa以下，在目前技术条件下可分离出的羊栖菜多糖主要包括岩藻聚糖硫酸酯、褐藻胶、褐藻多糖硫酸脂以及褐藻淀粉等。

呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)是肺病毒属副黏液科RNA病毒，是从鼻伤风的黑猩猩体内分离，因其可以使病变细胞融合为多核巨细胞，故被称为呼吸道合胞病毒。RSV常见于温带地区春冬季节及热带地区雨季条件下，易感人群包括婴幼儿以及老年人等抵抗力较差的群体，RSV具有爆发时间长，流行地域广等特点。RSV的传播途径主要为飞沫传播，其次是被污染后的手指将RSV接种到鼻粘膜、眼粘膜等部位,进而诱发感染。

因对婴幼儿免疫机能研究的不足、母体遗传引起的幼儿免疫差异及婴幼儿和老年人等易感人群对RSV免疫应答等不可控因素的存在，使当下尚无针对治疗RSV的疫苗或特效药，西药治疗中如支气管扩张剂沙丁胺醇、抗炎药物糖皮质激素等可用于RSV感染辅助用药，但在临床上存在影响生长发育、骨代谢等不良反应。而中药及复方制剂因毒副作用较小,在抗病毒方面拥有独特的优势。许多试验表明中药能够下调基因表达，降低炎症因子的表达量，还可以通过调节机体的免疫力等来发挥其抗RSV作用。

本申请人首次发现羊栖菜多糖对RSV及EV71病毒均有显著的抑制作用，并申请了专利CN201610763357.4，将羊栖菜粉末与蒸馏水混合后水煮、换液提取，将提取后的滤液浓缩后，加入5％三氯乙酸，离心去除蛋白质，然后将得到的溶液透析后冷冻，加入95％乙醇沉淀多糖，离心取沉淀，真空干燥得到羊栖菜多糖粉末。将上述所得羊栖菜多糖进行抑毒试验，结果显示其药物抑毒指数T I达到955.43，对病毒具有显著的抑制作用。但本申请人在深入研究羊栖菜的抗病毒作用机理过程中，发现上述方法制备得到的混合物羊栖菜多糖分子量跨度大，最低分子量在1kDa以下，最高分子量可达几千kDa，直接影响羊栖菜多糖的活性，削弱了其对RSV的抑制作用，表现为药物抑毒指数不足。

发明内容

因此，针对上述指出的缺陷和不足，本发明提供羊栖菜分段多糖的制备方法及其在制备抗RSV药物中的应用，对RSV的抑制作用明显提高，T I可达4000以上，对推动抗RSV药物的实用化进程具有理论和实用的双重意义，同时为羊栖菜的抗病毒作用机理奠定了基础。

为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

羊栖菜分段多糖的制备方法，包括以下步骤：

(1)将羊栖菜粉末与蒸馏水混合，开启搅拌并进行升温，加热至沸腾后继续搅拌2～4h，取滤液经过浓缩、冷冻干燥得到羊栖菜粗多糖；