[发明专利]一种基于适配体结构变化的CRP敏感捕获方法

说明书

本发明属于传感器的技术领域，具体涉及一种基于适配体结构变化的CRP敏感捕获方法，根据检测物核酸CRP序列设计选择其适配体序列，将修饰有氨基基团的CRP适配体固定在材料修饰的电极表面，在3'或5'末端功能化的适配体的应用会导致它们在固体表面上的垂直方向，CRP适配体与检测物的核酸序列之间特异性识别，适配体的发卡结构打开，与电极表面的接触面积增大，从而促进电子转移，改变电流信号。本发明能够对炎症标记物CRP的特异性检测。本发明可以直接检测与CRP偶联的适配体的结构变化产生的电流信号，本发明的电化学适配体传感器检测精度高，检测范围大，能够满足对炎症标记物CRP精准检测的需求。

技术领域

本发明属于传感器的技术领域，具体涉及一种基于适配体结构变化的CRP敏感捕获方法。

背景技术

CRP是由肝细胞合成的一种急性蛋白，当受到炎症的刺激或细菌感染时，其值会在受刺激4～6h后开始升高，每隔8h升高1倍，一般36～50h达到峰值。随着炎症的恢复，CRP值会不断降低。人体中正常的CRP具有一定的生理作用，可增强机体的免疫能力。以往，由于检测CRP的方法比较落后，易产生假阴性和假阳性结果，在很大程度上影响了它在临床上的应用价值，故导致其临床作用被弱化。近年来，随着研究的进展，快速、灵敏、简便、可靠的检测CRP的方法已被建立，使得CRP在临床上的应用价值得以提升，其应用领域也大大增加。

现有的传感器存在检测精度较低，检测范围较小。

发明内容

本发明的目的在于：针对现有技术的不足，提供一种基于适配体结构变化的CRP敏感捕获方法，通过优化捕获方法，能够提高检测炎症标记物的精度。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种基于适配体结构变化的CRP敏感捕获方法，包括：

步骤一、基于适配体修饰的电极，对CRP的特异性捕获，适配体的发卡结构打开，增大与电极表面的接触面积；

步骤二、通过差分脉冲伏安扫描法对适配体构象变进行测定。

优选的，所述步骤一中，适配体具有两个发卡，当CRP与适配体结合之后，发夹结构打开与CRP特异性结合，适配体链由垂直方向部分弯折变成水平方向，并与电极表面接触。

优选的，所述步骤一中，适配体修饰的电极，包括：

在丝网印刷电极表面通过层层自组装的方法修饰AuNPs、GO-COOH、活化COOH、NH2-CRPapt，对目标物质CRP的检测。

优选的，对目标物质CRP的检测，包括：

(1)配制质量分数1％的NaAuCl4·2H2O溶液和浓度为0.5M的Na2SO4纳米金还原源溶液，按照体积比1:1滴加在SPE电极上，利用循环伏安电化学还原方法在电极表面继续修饰AuNPs；

(2)在步骤(1)修饰好的SPE/AuNPs电极上利用物理吸附的方式修饰GO-COOH，浓度为2mg/ml；

(3)将0.4mg EDC与1mL 0.1M MES以及0.5M氯化钠(pH＝6.0)混合并震荡，配置浓度为2mM的EDC溶液；并将0.6mg NHS与1mL PBS充分混合，配置浓度为5mM的NHS溶液。将EDC溶液及NHS溶液按1：1体积滴加到步骤(2)修饰的电极表面，并于室温下静置15min以实现对羧基的活化；

(4)在步骤(3)已经完成羧基活化的SPE/AuNPs/GO-COOH电极上通过脱水缩合作用固定CRP适配体，室温下过夜；

(5)在SPE/AuNPs/GO-COOH/NH2-CRPapt电极上滴加1mg/ml的BSA封闭修饰电极，4℃湿润环境下静置30min。

优选的，所述步骤二中，通过差分脉冲伏安扫描法对适配体构象变进行测定，包括：