[发明专利]一种基于适配体结构变化的CRP敏感捕获方法

权利要求书

1.一种基于适配体结构变化的CRP敏感捕获方法，其特征在于，包括：

步骤一、基于适配体修饰的电极，对CRP的特异性捕获，适配体的发卡结构打开，增大与电极表面的接触面积；

步骤二、通过差分脉冲伏安扫描法对适配体构象变进行测定。

2.如权利要求1所述的一种基于适配体结构变化的CRP敏感捕获方法，其特征在于：所述步骤一中，适配体具有两个发卡，当CRP与适配体结合之后，发夹结构打开与CRP特异性结合，适配体链由垂直方向部分弯折变成水平方向，并与电极表面接触。

3.如权利要求1所述的一种基于适配体结构变化的CRP敏感捕获方法，其特征在于，所述步骤一中，适配体修饰的电极，包括：

在丝网印刷电极表面通过层层自组装的方法修饰AuNPs、GO-COOH、活化COOH、NH2-CRPapt，对目标物质CRP的检测。

4.如权利要求3所述的一种基于适配体结构变化的CRP敏感捕获方法，其特征在于，对目标物质CRP的检测，包括：

(1)配制质量分数1％的NaAuCl4·2H2O溶液和浓度为0.5M的Na2SO4纳米金还原源溶液，按照体积比1:1滴加在SPE电极上，利用循环伏安电化学还原方法在电极表面继续修饰AuNPs；

(2)在步骤(1)修饰好的SPE/AuNPs电极上利用物理吸附的方式修饰GO-COOH，浓度为2mg/ml；

(3)将0.4mg EDC与1mL 0.1M MES以及0.5M氯化钠(pH＝6.0)混合并震荡，配置浓度为2mM的EDC溶液；并将0.6mg NHS与1mL PBS充分混合，配置浓度为5mM的NHS溶液。将EDC溶液及NHS溶液按1：1体积滴加到步骤(2)修饰的电极表面，并于室温下静置15min以实现对羧基的活化；

(4)在步骤(3)已经完成羧基活化的SPE/AuNPs/GO-COOH电极上通过脱水缩合作用固定CRP适配体，室温下过夜；

(5)在SPE/AuNPs/GO-COOH/NH2-CRPapt电极上滴加1mg/ml的BSA封闭修饰电极，4℃湿润环境下静置30min。

5.如权利要求1所述的一种基于适配体结构变化的CRP敏感捕获方法，其特征在于，所述步骤二中，通过差分脉冲伏安扫描法对适配体构象变进行测定，包括：

采用差分脉冲伏安法对CRP进行电化学检测，扫描电压为-0.6V～0V，脉冲幅度为50mV，脉冲宽度为50ms，检测范围为0.001ng/mL～100ng/mL；

建立标准曲线，根据所检测不同浓度的CRP标准溶液检测的差分脉冲电流峰值与PBS溶液下检测的电流峰值差的绝对值和CRP标准溶液浓度对数绘制拟合曲线。