[发明专利]一种育苗生产中裙带菜幼体发育过程的精准观察方法

说明书

本发明公开了一种育苗生产中裙带菜幼体发育过程的精准观察方法，包括以下步骤：取育苗生产中的裙带菜游孢子液，用消毒海水稀释摇匀，5min中内注入盖有盖玻片的血球计数板的计数池中；在计数池中游孢子发育为胚孢子后，显微镜观察胚孢子，用计数池大方格中的网格给胚孢子定位并进行编号；取下盖玻片，将血球计数板悬吊于与血球计数板上胚孢子同一批次的裙带菜幼体的池水中，每天观察血球计数板上标记的裙带菜幼体的生长发育状态和发育阶段，并据此进行生产管理。本发明可持续精准跟踪观察数个裙带菜胚孢子的发育和生长情况，并据此对育苗池中的裙带菜幼体精准管理。

技术领域

本发明涉及裙带菜养殖技术领域，具体涉及一种育苗生产中裙带菜幼体发育过程的精准观察方法。

背景技术

裙带菜(Undaria pinnatifida W.F.R Suringar,1873)，又称和布、若布，属褐藻门(Phaeophyta)、褐藻纲(Phaeophyceae)、海带目(Laminariales)、翅藻科(Alariaceae)、裙带菜属(Undaria)藻类。裙带菜被民间称誉为长寿菜，营养丰富，经济价值高，同时裙带菜栽培对维护近海海域生态健康具有关键作用。裙带菜是我国三大养殖经济海藻之一，养殖年产量约20万吨干品。目前裙带菜种苗培育方法为全人工育苗。育苗生产中，裙带菜繁殖器官孢子囊在育苗池中释放游孢子。用显微镜检测育苗池海水中游孢子密度，100倍镜下每视野达到100个～200个游孢子时，将裙带菜孢子囊网袋取出，随即将苗种帘平铺于池水中，同时将载玻片悬吊于池水中。100倍显微镜下，载玻片上胚孢子密度达到60-120个/视野时，将苗种帘移到其它育苗池中，进入育苗管理。

育苗管理过程中，每天剪取苗帘绳小段，显微镜或解剖镜下观察胚孢子或胚孢子发育成的配子体或幼孢子体的状态，并据此进行育苗管理，包括光照强度、营养盐使用量、流水量调节等。但显微镜下观察苗帘绳上的裙带菜幼体时，由于苗帘绳不透明且表面粗糙不平，处于胚孢子或配子体期的裙带菜幼体附着在苗帘绳上，难以清晰观察，只能对裙带菜幼体的发育情况粗略判断；而解剖镜放大倍数不够，只适合观察发育到幼孢子体期个体较大的裙带菜幼体，不适合观察前期幼体的状态和发育程度。同时，每天观察后的苗帘绳都废弃掉，次日剪取新苗帘绳观察，因此每天观察的都是不同的胚孢子、配子体或幼孢子体。所以生产中难以对裙带菜幼体胚孢子和配子体阶段的发育情况准确把握。

准确观察胚孢子逐步发育成配子体、继而发育成卵囊或精囊、释放生殖细胞的过程和达到某一发育节点的时间，对把控育苗管理过程、适时调整育苗光照和施肥等条件，保证育苗成功具有重要生产意义。因此，裙带菜人工育苗生产中急需精准观察幼体发育过程的方法。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种育苗生产中裙带菜幼体发育过程的精准观察方法。本发明通过将游孢子液添加到盖有载玻片的血球计数板中，使有限个游孢子进入计数池中发育为胚孢子，利用血球计数板、计数池及计数池内大方格的网格对胚孢子定位并进行编号后，将血球计数板悬吊于育苗池中，可用显微镜持续准确观察编号的胚孢子的生长发育情况。根据胚孢子的生长发育情况确定育苗生产的光照、营养盐、流水等条件。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种育苗生产中裙带菜幼体发育过程的精准观察方法，包括以下步骤：

(1)取育苗生产中的裙带菜游孢子液，用消毒海水稀释摇匀，5min中内注入盖有盖玻片的血球计数板的计数池中；

(2)在计数池中游孢子发育为胚孢子后，显微镜观察，用血球计数板号、计数池号及计数池内大方格的网格位置给胚孢子定位并进行编号；取下盖玻片，将血球计数板悬吊于与血球计数板上胚孢子同一批次的裙带菜幼体的池水中，每天观察血球计数板上标记的裙带菜幼体的发育状态和发育阶段，并据此进行生产管理。

本发明所用血球计数板购自上海市求精生化试剂仪器有限公司，型号规格为XB-K-25，0.10mm，1/400mm²。