[发明专利]piRNA作为诊断标志物在法医鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间中的应用

说明书

本发明提供了piRNA作为诊断标志物在法医鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间中的应用，属于法医学鉴定技术领域；piRNA包括rno＿piR＿003035和rno＿piR＿005736。本发明的piRNA适用于急性心梗的鉴别，两种piRNA在心梗初期表达量就发生显著变化，因此能够应用本发明的piRNA实现对心梗急性或超急性期进行鉴定。此外，rno＿piR＿003035和rno＿piR＿005736还可以用于急性心梗持续时间的推断，对心梗4h内的个体进行心梗时间推断，误差在0.5h内，弥补了以往急性心梗时间难以推断的难题。

技术领域

本发明属于法医学鉴定技术领域，具体涉及piRNA作为诊断标志物在法医鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间中的应用。

背景技术

急性心梗(acute myocardial infarction，AMI)是心源性猝死的主要原因，且发病率呈逐年上升的趋势。对于AMI的急性期和超急性期，难以通过传统的病理形态学方法进行鉴别，因此急性心梗的鉴定是目前法医病理学鉴定的难点。

piRNA(Piwi-interacting RNA)是一类长约24～32nt的单链非编码RNA，作为重要的转录因子参与生命活动的调控，在心肌组织中表达丰度较高，具有应用于AMI鉴别的潜在价值。它具有以下优势：在人类基因组中已鉴定出超过3万种的piRNA，数量远多于其他非编码RNA；在多种组织器官中高丰度表达，具有组织特异性；在不同发育时期和不同疾病状态下也表现出时间和空间特异性；piRNA的5’端具有强烈的单磷酸尿嘧啶核苷酸倾向性， 3’端(2′-O-methyl)进行了甲基化修饰，使其具有相对较强的稳定性。近年来已有多项研究表明piRNA参与心血管疾病的调控，Min Li等研究发现piRNA 参与心肌分化，K.ShanmughaRajan1等研究发现了与心肌肥大相关的 piRNA。

目前，还没有关于将piRNA有作为心肌梗死鉴定标记物的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供piRNA作为诊断标志物在法医鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间中的应用。

本发明提供了piRNA作为诊断标志物在法医鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间中的应用；所述piRNA包括rno＿piR＿003035和rno ＿piR＿005736；所述rno＿piR＿003035的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述rno＿piR＿005736的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了piRNA作为诊断标志物在制备鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间的试剂或试剂盒中的应用；所述piRNA包括rno＿piR ＿003035和rno＿piR＿005736；所述rno＿piR＿003035的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述rno＿piR＿005736的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

优选的，所述急性心梗包括发病5min～4h内的急性心梗。

优选的，所述piRNA在急性心梗大鼠心肌组织中的表达水平上调。

本发明还提供了一种用于鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间的引物组，所述引物组包括第一引物和第二引物；

所述第一引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述第二引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

本发明还提供了一种用于鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间的试剂盒，包括上述方案所述的引物组和miRcute增强型miRNA荧光定量检测用试剂。

本发明还提供了一种用于法医鉴定急性心梗的方法，包括以下步骤：

1)分别提取待检心肌组织和正常心肌组织的piRNA，分别反转录得到待检心肌组织的cDNA和正常心肌组织的piRNA；