[发明专利]piRNA作为诊断标志物在法医鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间中的应用

权利要求书

1.piRNA作为诊断标志物在法医鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间中的应用；所述piRNA包括rno＿piR＿003035和rno＿piR＿005736；所述rno＿piR＿003035的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述rno＿piR＿005736的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.piRNA作为诊断标志物在制备鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间的试剂或试剂盒中的应用；所述piRNA包括rno＿piR＿003035和rno＿piR＿005736；所述rno＿piR＿003035的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述rno＿piR＿005736的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述急性心梗包括发病5min～4h内的急性心梗。

4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述piRNA在急性心梗大鼠心肌组织中的表达水平上调。

5.一种用于鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间的引物组，所述引物组包括第一引物和第二引物；

所述第一引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述第二引物的核苷酸序列如SEQID NO.4所示。

6.一种用于鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间的试剂盒，包括权利要求5所述的引物组和miRcute增强型miRNA荧光定量检测用试剂。

7.一种用于法医鉴定急性心梗的方法，包括以下步骤：

1)分别提取待检心肌组织和正常心肌组织的piRNA，分别反转录得到待检心肌组织的cDNA和正常心肌组织的piRNA；

2)分别以所述待检心肌组织的cDNA和正常心肌组织的piRNA为模板，利用权利要求5所述的引物组分别进行荧光定量PCR扩增，分别计算待检心肌组织和正常心肌组织的rno-piR-005736和rno-piR-003035的Ct值；

若待检心肌组织相对于正常心肌组织的rno_piR_005736表达水平上升2.38倍及以上、且piRNA-003035的表达水平上升2.14倍及以上，则判定发生急性心梗；否则，没有发生急性心梗。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述荧光定量PCR扩增的扩增体系以20μl计，包括以下组分：10μL2×miRcute Plus miRNA PreMix、0.4μL上游引物、0.4μL下游引物、2μL cDNA和7.2μL ddH₂O；

所述荧光定量PCR扩增的程序为：95℃、15min；94℃、20sec，64℃、30sec，72℃、34sec，5个循环；94℃、20sec，60℃、34sec，40个循环。

9.一种用于推断急性心梗持续发病时间的模型的构建方法，包括以下步骤：

测定不同急性心梗持续发病时间的心肌组织的rno-piR-005736和rno-piR-003035的表达量；

以不同急性心梗持续发病时间的rno-piR-005736和rno-piR-003035的表达量为自变量、以急性心梗持续发病时间为因变量，使用随机森林模型建立得到急性心梗持续时间推断模型。

10.一种法医推断急性心梗持续发病时间的方法，包括以下步骤：

测定待检心肌组织的rno-piR-005736和rno-piR-003035的表达量，导入权利要求9所述构建方法构建得到的急性心梗持续时间推断模型，输出急性心梗持续发病时间。