[发明专利]一种分泌胰岛素单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单克隆抗体与应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体公开一种分泌胰岛素单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单克隆抗体与应用。杂交瘤细胞株包括保藏编号为GDMCC NO：62021的杂交瘤细胞株Mab0329.11‑G9‑A5、保藏编号为GDMCC NO：62085的杂交瘤细胞株Mab0329.11‑G9‑B7。本发明通过获得分泌抗胰岛素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，获得针对胰岛素不同抗原表位获得两种单克隆抗体，该单克隆抗体特异性强、亲和力好、效价较高，可以准确检测出血清或血浆中的胰岛素含量，有利于检测胰岛素含量变化或诊断以胰岛素异常表达为表征的疾病。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种分泌胰岛素单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单克隆抗体与应用。

背景技术

胰岛素(INS)是胰岛β细胞合成和分泌的一种多肽类激素，由α链和β链组成，其中α链含21个氨基酸，β链含30个氨基酸，2个肽链由二硫键连接。胰岛素分子量约为6000D，等电点为5.3～5.4，是人体内唯一降低血糖的激素。

INS基因存在于所有细胞，并在这些细胞具有相同的拷贝和同样的结构，但只在胰岛β细胞高度特异地表达。在胰岛β细胞的细胞核中，第11对染色体短臂上胰岛素基因区DNA向mRNA转录，mRNA从细胞核移向细胞浆的内质网，转译成由110个氨基酸残基构成的前胰岛素原。前胰岛素原经过蛋白水解作用除其前肽，生成86个氨基酸组成的长肽链-胰岛素原(Proinsulin)。胰岛素原随细胞浆中的微泡进入高尔基体，经蛋白水解酶的作用，切去31、32、60三个精氨酸连接的链，断链生成没有生理活性的C肽，同时生成胰岛素，分泌到B细胞外，进入血液循环中。未经过蛋白酶水解的胰岛素原，一小部分随着胰岛素进入血液循环，胰岛素原的生物活性仅有胰岛素的5％。

胰岛素测定可用于糖尿病、胰岛素瘤及胰岛素抵抗综合症等疾病的诊断，以及准确判断胰岛β细胞的生理功能。现有技术中检测胰岛素含量变化或诊断胰岛素异常表达的手段还不够完善。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种分泌胰岛素单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单克隆抗体与应用，本发明的单克隆抗体特异性强、亲和力高，可以准确检测出血清或血浆中的胰岛素含量。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

第一目的，本发明提供了一种杂交瘤细胞株，包括保藏编号为GDMCC NO：62021的杂交瘤细胞株Mab0329.11-G9-A5、保藏编号为GDMCC NO：62085的杂交瘤细胞株Mab0329.11-G9-B7，杂交瘤细胞株Mab0329.11-G9-A5和杂交瘤细胞株Mab0329.11-G9-B7保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏时间分别为2021年10月28日和2021年11月29日。

第二目的，本发明提供了一种单克隆抗体，所述单克隆抗体由所述的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体，所述单克隆抗体特异性识别胰岛素。

本发明由上述的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体可以特异性检测血清或血浆样本中的胰岛素，提高检测胰岛素的准确性。

经过单克隆抗体效价检测的试验，杂交瘤细胞株Mab0329.11-G9-A5和杂交瘤细胞株Mab0329.11-G9-B7的效价均为1:128000，效价较高。

作为本发明所述单克隆抗体的优选实施方式，所述单克隆抗体可以识别胰岛素片段，所述胰岛素片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3所示。

本发明的单克隆抗体可以特异性识别上述氨基酸片段，用于检测血清或血浆中的胰岛素含量变化。