[发明专利]基于点击化学和ARGET-ATRP放大策略的电致化学发光检测试剂盒及方法

权利要求书

1.一种基于点击化学和ARGET-ATRP放大策略的电致化学发光检测试剂盒，其特征在于，包括以下原料：金电极、hairpin DNA、TCEP、MCH、鲁米诺、PBIB、AA、CuSO₄、BPDS、CuBr₂/ME₆TREN、NAS。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括超纯水、乙醇、DEPC水、DMSO和H₂O₂。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，部分原料使用时需配制成溶液，其中，hairpin DNA溶液的浓度为2μM，TCEP溶液浓度为10mM，MCH溶液的浓度为2mM，鲁米诺溶液的浓度为20mM，PBIB溶液的浓度为10mM，AA溶液的浓度为2mM，CuSO₄溶液的浓度为2mM，BPDS溶液的浓度为2mM，CuBr₂/ME₆TREN溶液的浓度为10mM，NAS溶液的浓度为10mM，H₂O₂溶液的浓度为10mM。

4.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，

发夹DNA的序列为5′-SH-(CH₂)₆-CCACGCAGACACACGCTCACACCTCCGTGG-N₃-3′。

5.一种检测烟草花叶病毒RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

①将hairpin DNA溶液滴加到金电极表面，在室温下放置过夜，清洗；

②将步骤①的电极浸泡在MCH溶液中，反应，清洗，吹干；

③将待检测样品溶液滴加到步骤②电极表面，孵育，洗涤；

④将步骤③的电极浸入点击化学反应溶液中，孵育，清洗；

⑤将步骤④的电极放置放入ARGET-ATRP反应溶液中，孵育，清洗；

⑥将步骤⑤的电极浸入鲁米诺溶液中孵育；

⑦将步骤⑥的电极放置在H₂O₂溶液中测定其发光强度。

6.根据权利要求5所述检测烟草花叶病毒RNA的方法，其特征在于，hairpin DNA溶液的制备方法为：

①将hairpin DNA加热保温后，冷却；

②加入等体积TCEP溶液，避光振摇，得到具有茎环结构的hairpin DNA溶液；

其中，hairpin DNA的加热温度为95℃，加热时间为10min，加热速度为1.6℃/s，冷却至25℃。

7.根据权利要求5所述检测烟草花叶病毒RNA的方法，其特征在于，先将金电极进行预处理，预处理方法为：将金电极打磨至镜面，清洗，吹干，备用。

8.根据权利要求5所述检测烟草花叶病毒RNA的方法，其特征在于，步骤②的避光振摇温度为37℃，时间为3～6h；步骤②的反应温度为37℃，时间为30～60min；步骤③的孵育温度为37℃，时间为90～120min；步骤④的孵育温度为37℃，时间为40～60min；步骤⑤的孵育温度为37℃，时间为60～90min；步骤⑥的孵育温度为37℃，时间为160～240min。

9.根据权利要求5所述检测烟草花叶病毒RNA的方法，其特征在于，点击化学反应溶液是由PBIB溶液、AA溶液和CuSO₄/BPDS溶液等体积混合制备而成；其中，CuSO₄/BPDS溶液是由CuSO₄溶液和BPDS溶液等体积混合制备而成；ARGET-ATRP反应溶液是由体积比7:1:1:1的DEPC水、AA溶液、CuBr₂/ME₆TREN溶液和NAS溶液混合制备而成。

10.一种如权利要求1所述试剂盒在烟草花叶病毒检测中的应用。