[发明专利]紫穗槐-4,11-二烯12-单加氧酶变体及其用途

权利要求书

1.一种变异紫穗槐-4,11-二烯12-单加氧酶多肽，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，其中所述序列还包含一个或多个氨基酸取代。

2.如权利要求1所述的变异多肽，其中所述一个或多个氨基酸取代选自A9D、I95L、I95V、E129N、R173I、V220I、T241N、K245C、L334M、Q346K、L351F、T421R、A443K、A443S、Q450K、S469C、T487C、L490C和V492M。

3.如权利要求2所述的变异多肽，其中所述一个或多个氨基酸取代选自A9D、I95V、E129N、V220I、T241N、L351F和Q450K。

4.如权利要求2所述的变异多肽，其中所述一个或多个氨基酸取代选自A9D、I95V、E129N、V220I、T241N、L334M、L351F和Q450K。

5.如权利要求2所述的变异多肽，其中所述一个或多个氨基酸取代选自A9D、E129N、V220I、L351I和Q450K。

6.如权利要求2所述的变异多肽，其中所述一个或多个氨基酸取代选自A9D、E129N、V220I、L351F和Q450K。

7.一种核酸，其编码前述权利要求中任一项所述的多肽。

8.一种宿主细胞，其包含权利要求1至6中任一项所述的多肽。

9.一种宿主细胞，其包含权利要求7所述的核酸。

10.如权利要求8或9所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞能够产生选自青蒿醇、青蒿醛和青蒿酸的化合物。

11.如权利要求10所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞能够产生青蒿酸。

12.如权利要求8至11中任一项所述的宿主细胞，其还包含编码选自青蒿ADH1和青蒿ALDH1的多肽的核酸。

13.一种产生靶p450酶的变体的方法，其包括：

获得编码靶p450的变体的核酸库；

用所述库转化宿主细胞群，使得每个库核酸可操作地连接到弱启动子；

将单个经转化的宿主细胞铺板到多孔板的单个孔中；

在产生试验化合物的条件下培养所述宿主细胞；

测量由所述经转化的宿主细胞产生的所述试验化合物的水平；和

选择相对于对照增加所述试验化合物的水平的变体。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述弱启动子选自pGAL10、pGAL2、pGAL1_v22、pGAL1_v25、pGAL1_v2、pGAL3和pGAL2_v22。

15.如权利要求13或14所述的方法，其中所述试验化合物是类异戊二烯。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述试验化合物选自半萜、单萜、倍半萜、二萜、三萜、类二倍半萜和类胡萝卜素。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述试验化合物选自青蒿醇、青蒿醛和青蒿酸。

18.如权利要求13或14所述的方法，其中所述试验化合物是混源萜类。

19.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述靶p450酶是紫穗槐-4,11-二烯12-单加氧酶。