[发明专利]一种马鞭草多糖的制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种马鞭草多糖的制备方法，采用本发明的制备方法首先用2‑3倍体积乙醇沉淀得到粗提物，简单有效的对马鞭草多糖进行了初步分离，使用蛋白酶对粗提物水溶液进行蛋白质降解，有效的解离了缠绕在一起的蛋白质和多糖两类大分子，然后对酶解产物直接进行特定柱层析纯化，得到本发明所述的具有抗炎症和抗氧化作用的马鞭草多糖，方法步骤简单有效。上述方法制备所得马鞭草多糖成分明确，其是均一杂多糖，重均分子量是290KDa的，单糖组成是半乳糖，葡萄糖，甘露糖，鼠李糖和阿拉伯糖组成，各单糖摩尔比为2.8:1.5:1:1:1.4。本发明制备得到的马鞭草多糖具有显著的抗炎和抗氧化作用，本发明所得马鞭草多糖可用于制备化妆品和医药用抗炎制剂。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种马鞭草多糖的制备方法与应用。

背景技术

马鞭草(Verbena Officinalis)为马鞭草科、马鞭草属植物的全草，在我国分布范围较广，资源丰富。中药马鞭草性味苦，具有活血散瘀、解毒和利水消肿等功效，主要用于治疗经闭痛经、痈肿、疟疾、水肿、热淋等疾病。

国内外对马鞭草的研究主要侧重于其醇溶性及水煎粗提物的化学成分上，对水溶性马鞭草多糖的研究也仅限于粗多糖水平。Chao-Chao Jin等(Optimization ofpolysaccharides extracted from Verbena officinalis L and their inhibitoryeffects on invasion and metastasis of colorectal cancer cells[J].TropicalJournal of Pharmaceutical Research,2017,16(10):2387- 2394)优化了马鞭草粗多糖的提取工艺，得到最佳提取条件是液料比27.5:1(mL/g)，提取时间92min，回流提取2次，在此条件下多糖实际提取率为1.48±0.06％，同时所得粗多糖具有抑制结肠癌细胞转移的作用。

上述现有技术对马鞭草多糖的研究仅限于粗多糖水平，且所得粗多糖成分不明确，因此对于马鞭草多糖的制备方法及其主要特征有必要进行深入研究，以期为化妆品所添加的天然生物活性物质的研发，以及药物成分的替代产品开发提供新的对象。

发明内容

本发明的目的之一，在于提供一种提高马鞭草多糖提取率的马鞭草多糖的制备方法，包括如下步骤：

(1)取干燥的马鞭草粉末，按照液料比20:1～100:1加入蒸馏水，恒温水浴锅65～95℃水浴提取120～240min，离心去除沉淀，得到粗提液；

(2)将步骤(1)所得的粗提液浓缩，加入浓缩液体积2～3倍的无水乙醇，4℃放置一定时间，5000r/min离心5min，取沉淀干燥后得马鞭草粗提物；

(3)将步骤(2)所得马鞭草粗提物500mg溶解于20mL蒸馏水，加入蛋白酶，37℃水浴保温48h，5000r/min离心5min，去除沉淀，得到酶解液；

(4)取步骤(3)所得酶解液上DEAE-Sepharose CL-6B层析柱，调节流速1mL/min，用蒸馏水洗脱16～20h，然后使用0.2～0.4mol/L NaCl溶液进行梯度洗脱，自动部分收集器设定每管收集12mL洗脱液，根据糖及蛋白质含量分布情况，合并第20～40管洗脱液，用截留分子量3500～5000的透析袋对收集液进行透析，流水和蒸馏水各透析24h，透析液浓缩后冷冻干燥，得到马鞭草多糖VOP，马鞭草多糖VOP的平均提取率为8.3％以上。

优选方式下，步骤(1)中取干燥的马鞭草粉末，按照液料比20:1加入蒸馏水，恒温水浴锅83℃水浴提取210min，5000r/min离心10min去除沉淀，得到粗提液。

优选方式下，所述步骤(2)中将步骤(1)所得的粗提液浓缩40倍，加入浓缩液体积2倍的无水乙醇。

优选方式下，所述步骤(3)中蛋白酶包括4mg胰蛋白酶和4mg蛋白酶K。