[发明专利]一种肝癌早期诊断试剂盒及其应用

说明书

本发明属于生物医药领域技术领域，具体涉及一种肝癌检测试剂盒及其应用方法。本发明公开了联合检测HBXIP、miRNA‑4784和LncRNA RP11‑624L4.1的表达水平在制备诊断肝癌的产品中的应用以及相关的检测试剂盒。另外，本发明还提供了HBXIP、miRNA‑4784和LncRNA RP11‑624L4.1在制备治疗肝癌的药物组合物的应用以及相关的药物组合物。本发明的试剂盒能够作为肝癌诊断的手段之一，具有检测快速方便、检测灵敏度高、特异度好、成本低，可以满足绝大多数肿瘤病人的检测需求，应用范围广。本发明的药物组合物对肝癌有较好的抑制作用，在肝癌治疗中具有重要的参考意义和现实意义。

技术领域

本发明属于生物医药领域技术领域。更具体地属于分子生物学技术领域，涉 及一种肝癌早期诊断试剂盒及其应用。

背景技术

肝癌是全世界第五个常见癌症，在癌症引起的死亡比例中排名第三。其中， 肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)占原发性肝癌的90％以上。

肝细胞癌是成人肝脏最常见的恶性肿瘤。HCC主要与肝硬化相关，肝硬化 是由慢性乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的。肝细胞癌的分 期对于确定治疗结果、选择合适的治疗方案至关重要。据报道，HCC常发生于 病毒性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎和酒精滥用所致的慢性肝病。目前常见的HCC 治疗方法有药物治疗、手术治疗等，其中药物治疗有索拉非尼(sorafenib)，手 术治疗有肝切除、肝移植。HCC的预后包括肿瘤的扩大、肿瘤组织学亚型、肝 功能障碍程度、患者的表现状态等因素。然而，只有大约30％的HCC患者有可 能通过手术或药物治愈。因此，需要新的、有效的治疗和诊断方法来进一步开展HCC诊断和治疗，提高HCC的早发现和患者的生活质量。最近，发现非编码 RNA(non-codingRNA，ncRNAs)表达与HCC反复突变相关，从而为HCC的治 疗和预防提供了新的研究方向。

进入21世纪后，随着现代生物技术突风猛进的发展，尤其是基因测序技术 和基因组分析技术的成熟，科学家们发现大部分基因被转录为非编码 RNA(non-coding RNA，ncRNAs)。非编码RNA根据RNA编码长度的不同分为 两种，一种为长度小于200个核苷酸的RNA，主要有微小RNA(miRNAs)，小干 扰RNA(siRNAs)等，其中，miRNAs是一种小的(约22个核苷酸)非编码RNA， 在细胞增殖、分化、凋亡和癌变等多种生物学和病理过程中起着重要作用； miRNAs参与了肿瘤发展的各个阶段，表明miRNA的异常表达在肿瘤发展过程 中对已知癌基因或抑癌基因的表达起着重要的调节作用。另外一种为长度超过 200个核苷酸的长链非编码RNA(long non-codingRNA,LncRNA)，长链非编码RNA的长度一般在200-100000个核苷酸之间，位于细胞核或胞质内，按照其来 源可分为Antisense LncRNA(反义长非编码RNA)，Intronic tran(内含子非编码 RNA)，Long intergenc noncoding RNA(lincRNA)，Promoter-associated LncRNA(启 动子相关LncRNA)，UTR associated LncRNA(非翻译区LncRNA)五种类型。长链 非编码RNA具有mRNA相似的结构，经剪接，具有ployA尾巴以及启动子结构， 其分化过程中有动态的表达以及不同的剪接方式，形成不同的LncRNA；LncRNA 在表观遗传、转录及转录后水平上调控基因的表达，其参与了X染色体沉默、 基因组印记以及染色质修饰、转录激活、转录干扰、核内运输等多种重要的调控 过程，与人类疾病的发生、发展和防治有着密切的关系。

发明内容

本发明要解决的技术问题一是筛选合适可用于肝癌诊断或治疗的分子标志 物，其中包含了蛋白、miRNA和LncRNA；二是在此基础上，开发一种用于检 测肝癌的基因试剂盒，克服现有技术中仅检测miRNA和/或LncRNA可能存在的 假阳性或假阴性的问题。

因此，本发明的目的是提供一种肝癌的基因检测试剂盒以及应用。本发明另 一目的是提供肝癌分子标志物在筛选治疗肝癌的候选药物中的应用。