[发明专利]一种调节巨噬细胞极化状态的方法

说明书

本申请涉及生物医药技术领域，具体公开了一种调节巨噬细胞极化状态的方法，该方法包括采用过表达HIMF基因感染巨噬细胞或者特异性siRNA敲减或整体敲除巨噬细胞中HIMF基因的步骤。通过上述方式，本申请采用过表达HIMF基因感染巨噬细胞或特异性siRNA敲减或整体敲除巨噬细胞中HIMF基因，影响不同极化类型的巨噬细胞的功能，从而抑制炎症的发生发展，并延缓心肌梗死的发生。

技术领域

本申请涉及生物医药领域，特别是涉及一种调节巨噬细胞极化状态的方法。

背景技术

巨噬细胞是由骨髓系祖细胞极化为单核细胞后进入血液，迁移至组织中极化形成的。根据激活方式以及功能的差异，巨噬细胞分为经典型(M1型)和替代型(M2型)。在细菌毒素LPS或Th1类细胞因子(TNFα，IFNγ)等刺激下，巨噬细胞被激活极化为M1型，表达和释放相关标志基因和活性氧，具有杀灭病原体、清除坏死组织和促进炎症反应发生的作用；与之对应，在Th2类细胞因子(IL-4，IL-13)等诱导下，巨噬细胞被激活为M2型，表达抗炎因子(如TGFβ，IL-10)，具有消退炎症、促进组织生长和修复的作用。

研究发现，两种不同的极化巨噬细胞在炎症疾病的发生过程中具有重要的调控作用，在不同的微环境响应不同刺激时，可以在功能上相互转变；而阻断M1型巨噬细胞的功能，维持M2型极化细胞的抗炎修复特性，对抑制炎症的发生发展具有重要作用。因此，寻找一种有效的方法调节巨噬细胞的极化状态，在预防和治疗炎症相关疾病方面意义重大。然而，目前有效的调节巨噬细胞极化的方法较少。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本申请提供了一种调节巨噬细胞极化状态的方法，采用过表达HIMF基因感染巨噬细胞或特异性siRNA敲减或整体敲除巨噬细胞中HIMF基因，影响不同极化类型的巨噬细胞的功能，从而抑制炎症的发生发展，并延缓心肌梗死的发生。

为达此目的，本申请采用以下技术方案：

第一方面，本申请提供了一种调节巨噬细胞极化状态的方法，所述方法包括采用过表达HIMF基因感染巨噬细胞或者特异性siRNA敲减或整体敲除巨噬细胞中HIMF基因的步骤。

其中，所述采用过表达HIMF基因感染巨噬细胞的步骤，包括：构建过表达HIMF基因的腺病毒载体；将所述巨噬细胞接种于多孔板中；待所述巨噬细胞的细胞密度达预设值时，用所述过表达HIMF基因的腺病毒载体感染所述巨噬细胞。

其中，将所述巨噬细胞接种于多孔板中的步骤之前，所述方法还包括：分离和培养骨髓来源巨噬细胞：将小鼠脱颈处死，依次浸泡于两个75％酒精烧杯中；用剪刀剪断大腿，分离股骨和胫骨，剔除皮肉后置于培养基中；剪断股骨和胫骨的关节面，暴露骨髓腔，用注射器冲洗骨髓腔，移液枪吹散细胞；细胞经细胞筛过滤后，收集细胞悬浮液至离心管中；离心，弃上清，用含有巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)的培养基重悬细胞，接种于多孔板中进行培养；3天后添加含有MCSF的培养基，再培养3天后获得的成熟的所述骨髓来源巨噬细胞。其中，所述巨噬细胞包括RAW264.7和/或骨髓来源巨噬细胞。

第二方面，本申请提供了一种调节巨噬细胞极化状态的药物组合物，所述药物组合物包括过表达HIMF基因的腺病毒载体。

其中，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的任意一种或至少两种的组合。

其中，所述过表达HIMF基因的腺病毒载体的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。

SEQ.ID.NO.1：