[发明专利]重组蛋白和猪流行性腹泻疫苗组合物

说明书

本发明提供一种重组蛋白和猪流行性腹泻疫苗组合物。重组蛋白是由来自猪流行性腹泻病毒S蛋白(Spike，纤突蛋白)的截短片段与猪IgG的Fc片段串联而成的融合蛋白，S蛋白的截短片段优选选自S蛋白的S1亚基中具有唾液酸结合活性的N端结构域(NTD)、中和表位域(COE)以及S2亚基中的多个B细胞识别表位。疫苗组合物包含了重组蛋白以及佐剂。本发明的重组蛋白免疫小鼠后能够产生较高水平的IgG抗体和中和抗体滴度，CD³⁺CD⁴⁺、CD³⁺CD⁸⁺淋巴细胞比例和淋巴细胞中IFN‑γ、IL‑4浓度均表现出显著升高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种重组蛋白和猪流行性腹泻疫苗组合物。

背景技术

猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV)属于Ⅰ类冠状病毒，引起猪流行性腹泻病，这是一种具有高度传染性的肠道疾病，其特征是严重的水样腹泻、呕吐和脱水，以及一些全身症状，如呕吐、发烧、厌食和嗜睡。对乳猪来说，其对脱水的敏感性较强，表现为更严重的临床症状，在全球范围内给养猪业造成了巨大的经济损失。

目前市面上售卖的猪流行性腹泻疫苗主要都是传统的PEDV灭活疫苗和弱毒疫苗。但是灭活疫苗需要接种很大的剂量，单次的接种不能产生足够的免疫力，不适用紧急预防接种。弱毒疫苗存在扩散病毒和返强的风险。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的一方面在于提供一种重组蛋白，所述重组蛋白是由来自猪流行性腹泻病毒S蛋白(Spike，纤突蛋白)的截短片段与猪IgG的Fc片段串联而成的融合蛋白。

术语“猪流行性腹泻病毒S蛋白”是猪流行性腹泻病毒的主要结构蛋白之一，由1383个氨基酸组成。S蛋白是负责病毒附着、受体结合和进入的主要包膜糖蛋白，依据与其他冠状病毒S蛋白的同源性，也可以把猪流行性腹泻病毒S蛋白分为负责介导病毒和细胞表面受体附着的S1亚基(1～725aa)以及参与病毒和宿主细胞膜融合的S2亚基(726～1383aa)。

术语“猪IgG的Fc片段”是指猪免疫球蛋白G重链恒定区的CH2和CH3，其包括天然氨基酸序列及其序列衍生物(即，突变体)。

本发明的重组蛋白中S蛋白的截短片段优选选自S蛋白的S1亚基中具有唾液酸结合活性的N端结构域(NTD)、中和表位域(COE)以及S2亚基中的多个B细胞识别表位。

进一步优选地，所述S蛋白的截短片段包括：具有SEQ ID NO.1所示氨基酸序列或者SEQ ID NO.1所示氨基酸序列经替换、缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基形成的具有同等功能的氨基酸序列的片段，具有SEQ ID NO.2所示氨基酸序列或者SEQ ID NO.2所示氨基酸序列经替换、缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基形成的具有同等功能的氨基酸序列的片段，以及具有SEQ ID NO.3所示氨基酸序列或者SEQ ID NO.3所示氨基酸序列经替换、缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基形成的具有同等功能的氨基酸序列的片段。

所述猪IgG的Fc片段优选具有SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。

优选地，所述重组蛋白具有或包括SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列或者SEQ IDNO.5所示氨基酸序列经替换、缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基形成的具有同等功能的氨基酸序列。

优选地，所述重组蛋白是利用真核表达系统外源表达具有SEQ ID NO.6所示DNA序列的重组基因得到的重组蛋白。

优选地，所述重组蛋白是利用哺乳动物细胞表达系统外源表达具有SEQ ID NO.6所示DNA序列的重组基因得到的重组蛋白。

本发明还提供所述重组蛋白的应用，所述重组蛋白用于制备猪流行性腹泻病毒疫苗和/或用于检测猪流行性腹泻病毒抗体。