[发明专利]具有细胞定位功能的细胞培养板及其制备方法和细胞定位的方法

说明书

本发明公开一种具有细胞定位功能的细胞培养板及其制备方法和细胞定位的方法。该具有细胞定位功能的细胞培养板的板孔内设有定位区，该定位区能够将板孔内的细胞由定位区的外围区域导向至并定位于该定位区。该定位区对细胞的亲和力大于定位区的外围区域对细胞的亲和力。该细胞培养板是通过物理或化学方式对细胞培养板的板孔内预定区域的材料表面进行改性而得到。使用该细胞培养板接收由流式细胞仪分选出的细胞，基于定位区与定位区的外围区域对细胞的亲和力的差异促使细胞定位于定位区。本发明提供的细胞培养板及定位方法能够将板孔内的细胞引导至预定区域，实现对细胞的定位。

技术领域

本发明属于生物制药领域，特别是涉及对细胞培养板进行改进得到的具有细胞定位功能的细胞培养板、细胞培养板的制备方法和结合荧光激活细胞分选技术实现细胞定位的方法。

背景技术

流式荧光细胞分选(FACS)技术被广泛应用于单克隆细胞分选。流式细胞仪的工作原理是将待测细胞经特异性荧光染料染色后放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱，后者与入射的激光束垂直相交，液柱中的细胞被激光激发产生荧光。仪器中一系列光学系统(透镜、光阑、滤片和检测器等)收集荧光、光散射、光吸收或细胞电阻抗等信号，计算机系统进行收集、储存、显示并分析被测定的各种信号，对各种指标做出统计分析。科研型流式细胞仪还可以根据所规定的参量把指定的细胞亚群由细胞培养板分别接收而从整个群体中分选出来，以便对分选出的细胞进行进一步的研究分析。

然而，现有技术中，由细胞培养板(如96孔板)接收的被分选出的单克隆细胞通常是随机分布在细胞培养板的板孔内不同区域，需要通过人工方式从板孔内寻找粘附的细胞。这种方式产生的问题主要在于：细胞位置不确定，人工通过显微镜观察各板孔内细胞的位置，需要耗费较多的时间，效率低。尤其是对于那些位于细胞培养板的板孔边角的单克隆细胞，很难在显微镜下快速地观察到，容易被忽略。这种需要人工观察寻找粘附的细胞的方式，也导致了分选出的单克隆细胞在后续操作中无法实现自动化。综合分析以上问题产生的主要原因在于，现有的细胞培养板的表面为均匀分布的疏水性材料，表面各区域对细胞的附着力基本一致，因此，被分选出的细胞进入板孔内的位置是随机分布的，没有准确的定位。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种对细胞具有定位功能的器具或方法，能够将细胞培养板的板孔内的细胞引导至预定区域，实现对细胞的定位。

第一方面，为解决上述技术问题，本发明提供一种具有细胞定位功能的细胞培养板，其中，所述细胞培养板的板孔内设有定位区，所述定位区能够将所述板孔内的细胞由所述定位区的外围区域导向至并定位于所述定位区。

具体地，所述定位区对细胞的亲和力大于所述定位区的外围区域对细胞的亲和力。

具体地，所述定位区的疏水性比所述定位区的外围区域的疏水性弱。优选地，所述定位区的外围区域为疏水性，所述定位区为非疏水性。

具体地，所述定位区设置于细胞培养板的板孔内的材料表面。

具体地，所述细胞培养板的各板孔内均设置一个定位区。

具体地，所述定位区位于所述板孔的中心区域。

具体地，所述定位区是通过物理或化学方式对细胞培养板的板孔内预定区域的材料表面进行改性，使预定区域的材料表面在改性后相比改性前对细胞的亲和力提高而形成。

优选地，所述定位区是通过物理或化学方式对细胞培养板的板孔内预定区域的材料表面进行改性，使预定区域的材料表面的疏水性在改性后相比改性前减弱。

优选地，所述定位区是通过刻蚀方式有选择地将细胞培养板的板孔内表面的预定区域的表面材料进行去除，使预定区域在去除后相比去除前对细胞的亲和力提高而形成。即，将该预定区域进行刻蚀而形成定位区。