[发明专利]基于神经酰胺、鞘磷脂和富含花生四烯酸酰基链的磷脂的喉癌分析方法及应用

说明书

本发明涉及脂质组学喉癌分析方法以及应用。基于神经酰胺、鞘磷脂和富含花生四烯酸酰基链的磷脂的喉癌分析方法，采集血清样本和/或组织样本，并进行相应处理，添加脂质内标化合物脂质内标化合物均质，离心分离取上层有机相干燥后储存在‑80℃；脂质组采用超高效液相色谱结合三重TOF 5600 Plus质谱仪系统进行分析；脂质的定量检测利用MultiQuant™2.1进行操作，质量宽度为±0.05 Da,tR宽度为±0.25 min，所有脂质组学数据均按照相应的脂质内标进行标准化。本发明提出了脂质组学在喉癌的诊断中的作用，脂质组学筛查喉癌时间短，出结果时间快，效率高，价格较低，节省了大量的时间和费用。

技术领域

本发明涉及脂质组学的功能与应用领域，具体涉及脂质组学喉癌分析方法以及应用。

背景技术

喉癌是最常见的头颈部癌症，造成沉重的卫生保健和经济负担，喉癌占全身恶性肿瘤的1％-5％，占呼吸道恶性肿瘤的65％-75％，且国内喉癌发病率呈上升趋势，尤其是东北地区。喉头是颈部的一个小而重要的器官。喉部的功能障碍可导致严重的健康问题，如声音嘶哑、呼吸窘迫和发音困难。全球疾病负担癌症协作组织目前估计喉癌发病率为211/1000，男女比例为5:1，约10％的患者处于转移期或终末期[1]。值得注意的是，在过去30年中，这种恶性肿瘤的负担(以已残疾的年数(YLDs)来表示)增加了近25％。

部分喉癌患者已确诊为晚期，治疗效果不理想。早期发现喉癌对该病的治疗至关重要。虽然一些成像方法，如计算机断层扫描(CT)、磁共振成像(MRI)和正电子发射断层扫描(PET)，通常用于喉癌的筛查和检测，但目前的成像方法受到一些话题的挑战，这些话题是初级保健工作者是否有能力评估图像，并且影像学检查也存在一定的缺陷，比如CT无法发现微小的癌肿，容易误诊等，MRI对钙化灶显示不直观，检查时间长等，PET清晰度较差，显像价格较高，费时等。因此，迫切需要确定新的生物标志物用于喉癌筛选或检测。

肿瘤标志物是指伴随肿瘤出现或在肿瘤中含量大大超过正常组织，可以提示体内肿瘤存在的物质。肿瘤标志物通常是增加的抗原、酶、受体、激素或代谢产物形式的蛋白质、癌基因和抑癌基因及其相关产物等成分，也可以是基因的表观遗传学的或者糖组学成分。这些成分是由肿瘤细胞产生和分泌，或是被释放的肿瘤细胞结构的一部分，或是机体对肿瘤细胞的特定反应，他们不仅仅存在于肿瘤组织内，还常可释放至血清或者其他体液中，能在一定程度上反应体内肿瘤的存在，可通过免疫学、分子生物学及蛋白质组学等技术测定其表达的水平，从而应用于临床，作为肿瘤的辅助诊断，监测肿瘤治疗的疗效以及判断预后的指标。脂质组学是对生物样本中脂质进行全面系统的分析，从而揭示其在生命活动和疾病中发挥的作用。脂质组学从脂代谢水平研究疾病的发生、发展过程的变化规律，寻找疾病相关的脂生物标志物，进一步提高疾病的诊断效率，并为疾病的治疗提供可靠的依据。脂质组学研究的重点是复杂生物基质中脂质的综合分析，是识别疾病相关脂质内标化合物、探索疾病发展过程中脂质代谢紊乱的有力工具。它已被广泛应用于糖尿病、肺癌、肝癌等许多研究中。不幸的是，目前还没有喉癌相关的脂质组学研究。

发明内容

为解决上诉现有医学方面关于喉癌分析技术的缺陷和不足，本发明的目的是提供一种基于神经酰胺、鞘磷脂和富含花生四烯酸酰基链的磷脂的喉癌分析方法，利用基于UHPLC/Q-TOF质谱的非靶向脂类组学方法获得脂质体谱数据，确定诊断喉癌和早期喉癌可靠的血清生物标志物，并全面阐明喉癌发病和发展相关的异常代谢情况，在喉癌医学应用更有价值。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

基于神经酰胺、鞘磷脂和富含花生四烯酸酰基链的磷脂的喉癌分析方法，

S1样本处理：采集血清样本和/或组织样本，并进行相应处理，

血清样本处理，在手术切除前收集喉癌血清样本，并在-80℃条件下保存用于脂质组学分析，冷冻血清样品经解冻，涡旋均质，添加脂质内标化合物，离心分离取上层有机相干燥后储存在-80℃；