[发明专利]一种提高抗家蚕杆状病毒感染的方法

说明书

本发明公开了一种提高抗家蚕杆状病毒感染的方法，具体是使用V‑ATPase Vo复合体抑制剂处理家蚕、通过降低Bm Voa4基因在家蚕中的表达或使Bm Voa4基因突变致功能丧失，研究显示使用4nM的巴佛洛霉素A1处理可以完全抑制病毒的复制，然后选择巴佛洛霉素A1的靶基因进行研究发现，干涉Bm Voa4的细胞中病毒含量显著减少，其在感染后24h和48h的病毒含量分别为对照的74％和68％，但干涉Bm Voa3和干涉Bm Voc并不能减少病毒含量，表明Bm Voa4是巴佛洛霉素A1的靶基因，通过靶向Bm Voa4基因的试剂可用于防治家蚕核型多角体病毒感染的药物研发和生产，具有推广价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种提高抗家蚕杆状病毒感染的方法。

背景技术

家蚕是一种产丝的有益昆虫，具有重要的经济价值。在我国很多农村地区，养蚕业是当地经济的支柱性产业和农民的主要经济收入来源，蚕丝业每年为蚕农创收上百亿元。但是，家蚕却面临严重的疾病威胁，核型多角体病毒病是蚕业生产上最常见而且危害最严重的一类蚕病，引起该病的病原为核型多角体病毒(BmNPV)，该病的传染力极强并且难以控制。BmNPV病毒主要通过经口试下感染家蚕，首先侵染家蚕中肠细胞。

目前对家蚕核型多角体病毒病的治疗尚无特效药物，生产上主要是通过使用化学消毒剂加强养蚕期严格的消毒来预防感染和疾病的扩散，主要由氯制剂、醛制剂、表面活性剂和生石灰等，因此亟需一种适合用于治疗家蚕核型多角体病毒病的一种药物。

巴佛洛霉素A1(Bafilomycin A1，BafA)，也称为NSC381866，来源于灰色链霉菌(Streptomyces griseus)的一种大环内酯类抗生素，分子式为C35H58O9。巴佛洛霉素A1是一种强效、选择性的液泡型ATP合成酶(V-ATPase)抑制剂，在哺乳动物、植物或真菌细胞内阻断这些质子泵活性，IC50在4-400nM范围内，尚未发现其对家蚕核型多角体病毒病是否具有治疗效果。V-ATPase由保守的V1复合体和非保守的Vo复合体组成，V1、Vo复合体又分别由多个亚基组成。通过生物信息学分析显示，从家蚕基因组数据库中系统鉴定了Vo复合体的11个亚基成员，包括a亚基的4个成员BmVoal、BmVoa2、BmVoa3、BmVoa4。但是上述基因是否参与家蚕对BmNPV的抵抗目前还不清楚。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种提高抗家蚕杆状病毒感染的方法；本发明的目的之二在于提供靶向BmVoa4基因表达的试剂在制备抑制BmNPV增殖的药物中的应用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、一种提高家蚕抗杆状病毒感染的方法，使用V-ATPase Vo复合体抑制剂处理家蚕、通过降低BmVoa4基因在家蚕中的表达或使BmVoa4基因突变致功能丧失。

优选的，所述降低BmVoa4基因在家蚕中的表达的方法是使用siRNA技术或shRNA技术降低BmVoa4基因表达。

优选的，所述V-ATPase Vo复合体抑制剂为巴佛洛霉素A1。

优选的，所述BmVoa4基因突变的方法是使用CRISPR-Cas9基因编辑技术使BmVoa4基因缺失、移码或插入致突变。

优选的，所述siRNA技术是使用dsRNA诱发产生siRNA。

优选的，所述dsRNA的靶标序列如SEQ ID NO.20所示。

2、靶向BmVoa4基因表达或突变的试剂在制备抑制BmNPV增殖的药物中的应用。

优选的，所述靶向BmVoa4基因表达的试剂为RNAi干扰试剂，靶向BmVoa4基因突变的试剂为CRISPR-Cas9基因编辑试剂。

优选的，所述RNAi干扰试剂为siRNA片段。