[发明专利]一种守宫粉提取物的抗病毒用途及其提取方法

说明书

本发明公开一种守宫粉提取物的抗病毒用途，抗病毒用途包括以下操作步骤，所述操作步骤如下：S1：选择实验动物、细胞、病毒和提纯后的守宫粉提取物；S2：细胞毒性测定；S3：抗病毒测定；S4：免疫荧光分析；S5：qRT‑PCR；S6：蛋白质印迹；S7：守宫粉提取物对RABV感染小鼠的治疗；S8：得出结论。提取方法包括以下步骤：守宫粉称重加热；抽滤；对抽滤后的提取液浓缩；离心，分离出上清；将上清旋蒸；透析；旋蒸；得粗提物，冷藏保存。本发明本发明守宫粉提取物的抗病毒用途，提纯后的守宫粉可用于抑制狂犬病病毒的增殖，能够有效的抑制狂犬病病毒，具有很好的药用价值，可用于制备抗狂犬病病毒药物，提取方法可靠性高、过滤提纯效果好、操作简单可行。

技术领域

本发明涉及一种守宫粉提取物的新用途，具体是一种守宫粉提取物的抗病毒用途及其提取方法。

背景技术

目前针对狂犬病并无有效的治疗药物，守宫是一种小型蜥蜴，常用于中药。可治疗多种恶性肿瘤的临床疗效，此外，它的毒性和副作用比传统化疗药物更少。在中国古籍《本草纲目》和《平安圣方》中，首宫散被推荐用于治疗中风。以其为原料制备的中成药金龙胶胶囊，用于治疗结直肠癌、食管癌、胃癌、肺癌。因此，守宫散具有抗肿瘤和抗病毒作用。从传统中药中筛选具有低毒副作用、易于代谢、无耐药性等优点的抗病毒药物已成为抗病毒药物研究开发的热点之一。本发明通过体外和体内模型研究寿宫提取物对狂犬病病毒的抑制作用，现提出一种守宫粉提取物的抗病毒用途及其提取方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种守宫粉提取物的抗病毒用途及其提取方法，能够有效解决上述问题，本发明本发明守宫粉提取物的抗病毒用途，提纯后的守宫粉可用于抑制狂犬病病毒的增殖，能够有效的抑制狂犬病病毒，具有很好的药用价值，可用于制备抗狂犬病病毒药物，提取方法可靠性高、过滤提纯效果好、操作简单可行。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种守宫粉提取物的抗病毒用途，抗病毒用途包括以下操作步骤，所述操作步骤如下：

S1：选择实验动物、细胞、病毒和提纯后的守宫粉提取物；

S2：细胞毒性测定；

S3：抗病毒测定；

S4：免疫荧光分析；

S5：qRT-PCR；

S6：蛋白质印迹；

S7：守宫粉提取物对RABV感染小鼠的治疗；

S8：得出结论，守宫粉提取物的细胞毒性、守宫粉提取物的体外抗病毒作用和守宫粉提取物在体内的抗病毒作用。

进一步地，所述S1中，实验动物选用SPF级昆明小鼠、雌性、18-22g，需在实验室中进行3天的适应期；

细胞选用BHK-21细胞，在含有5％胎牛血清的培养基中培养；

病毒选用RABV株CVS-11，在BHK-21细胞中繁殖，储存在-80℃，病毒滴度确定为50％组织培养物感染剂量(TCID50)/ml。

进一步地，所述S2中，细胞毒性测定需将BHK-21细胞以2×105/ml的密度接种在96孔板中，在37℃下孵育24h，用含各浓度守宫粉提取物(0.69、1.37、2.74、5.47、10.94、21.88和43.75mg)或IPS(0.125、0.25、0.5、1、2、5和10mM)的新鲜培养基替换培养基并孵育48h，用MTS分析评估存活的细胞级分，通过剂量-反应曲线的非线性回归分析确定最大半数细胞毒性浓度(CC50)。