[发明专利]一种橡胶草叶绿体提取方法在审
| 申请号： | 202110367518.9 | 申请日： | 2021-04-06 |
| 公开（公告）号： | CN113061567A | 公开（公告）日： | 2021-07-02 |
| 发明（设计）人： | 谢全亮;王旭初;李鸿彬 | 申请（专利权）人： | 石河子大学 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 成都中弘信知识产权代理有限公司 51309 | 代理人： | 张芳 |
| 地址： | 832003 新疆维吾尔自治区*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 橡胶 草叶 提取 方法 | ||
1.一种橡胶草叶绿体提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
A采集橡胶草植物的完整叶片；
B将所述叶片组织破碎后进行初提得到橡胶草叶绿体粗提液；
C在细胞分离液的上层加入所述橡胶草叶绿体粗提液后在4℃，进行第一次超高速离心10-15min；
D离心结束后在吸取所述细胞分离液的的沉淀，用叶绿体提取液清洗沉淀后进行第二次超高速离心12min，沉淀即可得完整橡胶草叶绿体。
2.根据权利要求1所述一种橡胶草叶绿体提取方法，其特征在于，所述初提的方法包括在所述叶片组织中按照重量比为100：1加入PVPP粉末充分研磨，在所述叶片组织的研磨样品中按照每克样品加入5mL叶绿体提取液，过滤研磨液加入叶绿体提取液。
3.根据权利要求1所述一种橡胶草叶绿体提取方法，其特征在于，所述叶绿体提取液的配置方法包括将0.3mM/L山梨醇，5mM/L乙二胺四乙酸EDTA，1mM/LMgCL2，10mM/LNaHCO3，0.5mM/L二硫苏糖醇DTT，按照体积比1:1:1:1:2的体积比混合后，用ddH2O定容到850mL完全溶解；接着加入100mL缓冲液溶液，调节酸碱度pH为7.5，全混匀后用ddH2O定容至1L得到所述叶绿体提取液。
4.根据权利要求1所述一种橡胶草叶绿体提取方法，其特征在于，所述细胞分离液按照由下至上依次铺70％浓度的细胞分离液1mL、50％浓度的细胞分离液2mL、30％浓度的细胞分离液3mL、10％浓度的细胞分离液4mL，最上面层加入1mL所述叶绿体粗提液。
5.根据权利要求1所述一种橡胶草叶绿体提取方法，其特征在于，所述超速离心为转速为8000RCF。
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