[发明专利]一种真菌菌种保存方法

说明书

本发明提供一种真菌菌种保存方法，将干热灭菌的变色硅胶颗粒和干燥的长满真菌菌丝和/或真菌孢子的小滤纸片放入透明或半透明的无菌微量离心管或无菌指形管中，微量离心管或指形管使用封口膜封口，存放在透明或半透明的微量离心管冷冻盒中，放置于﹣20℃冰箱保存。使用本发明的方法保存真菌菌种，菌种存活率高，保存时间长，菌种的干燥状态易于观察。此外，在稳定的低温干燥条件下，菌种处于休眠状态，菌种的生物学特性不容易发生退化，从而能够很好地保持菌种固有的性状。而且，该保存方法还具有菌种不容易被污染、查找菌种方便、菌种取用方便、设备要求简单、占用空间小、保存容量大、工作效率高、方便远距离携带及邮寄等优点。

技术领域

本发明属于微生物学技术领域，具体涉及真菌菌种的保存方法。

背景技术

真菌微生物学领域，无论是科研还是教学都离不开菌种。真菌菌种是生物学真菌研究工作正常运行的关键，菌种质量的高低决定着研究工作的成败。为使自然界分离的优质菌种能够保持原有的优良性状，最大限度地发挥作用，就需要尽可能完好地保存菌种。好的菌种保存方法不仅能够延长菌种的保存时间，还能够防止菌种功能退化，有效地保持菌种的优良性状。

真菌菌种的保存方法很多，各有优缺点。大体上可分为4类，即传代法、干燥法、低温干燥法及冷冻法。

传代法，也叫定期移植法，是将真菌菌种移植到斜面培养基上，放置室温或者放置4℃冰箱中保存。该方法操作简便，适用广泛，不需要特殊存储设备，费用低。但缺点是传代法中微生物的生长和代谢活动几乎没有受到抑制，因而保存时间较短，需要经常进行移植(三个月或者更短时间就需要移植一次)，繁琐费时。传代法最致命的缺点还是多次继代培养后菌种的生物学特性容易退化，失去菌种原有的优良性状。

干燥保存法，是将菌种干燥后放置在干燥室温环境下进行保存的方法。通常的做法是利用5％的脱脂牛奶洗涤真菌孢子，配制成高浓度的孢子悬浮液后加在无菌硅胶上，室温干燥后放在盛有硅胶的干燥器中进行保存。干燥保存法保存的菌种便于运输，保存时间长。但干燥保存法适用范围较窄，只能保存在培养基上产生孢子的真菌菌种，而且一直放置在干燥器中，保存容量有限。

低温干燥保存法，是将需要保存的真菌孢子悬浮在保护剂如脱脂牛奶中，无菌分装后置于冷冻液中，加干燥剂(如硅胶等)抽真空进行干燥，然后封口放低温冰箱中保存。低温干燥保存法保存的菌种存活率高、保存时间长、菌种稳定性高；但操作繁琐，需专用设备，而且同样只能保存产生孢子的菌种。

冷冻法保存，是将菌种保存于﹣80℃的超低温冰箱，或者超低温冷冻保存在液氮(﹣196℃)中，冷冻法保存的菌种保存时间长，菌种不易退化。但冷冻法操作复杂，需特殊设备，液氮还需要定期添加，费用高昂。

此外还有很多改进后的保存方法。如矿物油保存法，即传代法利用培养基斜面保存菌种时，在培养基上面加一层灭菌石蜡油，加的量应该超过斜面顶部1cm，然后放置室温保存或者放置冰箱中冷藏保存。矿物油保存法简便，而且保存时间比较长，而且不需专用设备。有实验证明，矿物油保存法保存的一种半知菌在保存45年后依然存活。但矿物油容易污染环境，占用空间大而且有异味，且矿物油保存法保存的菌种恢复时生长缓慢且外观带粘性，一般需要多移植1～2次才能恢复正常。

此外还有Richards保存法，是将菌种培养在Richards培养液中，然后收集孢子平摊在滤纸上，干燥24h后于4℃中冰箱保存。

此外还有滤纸低温保存法。滤纸低温保存法是将真菌孢子收集在滤纸上，或将滤纸放置在真菌菌落上让孢子生长到滤纸上，或者将滤纸与菌种共培养，让真菌菌丝和(或)孢子长到滤纸上，然后将滤纸干燥后放置于﹣20℃冰箱中保存。比较起来，滤纸低温干燥保存菌种是最为经济有效的方法。