[发明专利]一种蜜蜂精子超低温冷冻保存的方法

权利要求书

1.一种蜜蜂精子超低温冷冻保存的方法，其特征在于，其包括如下步骤：将待保存的蜜蜂精子与稀释液混合平衡静置1～2h后，加入冷冻保护剂平衡静置1h，然后进行程序降温，所述程序降温包括以3.5～4℃/min的速率从3～4℃下降到-60℃～-50℃，程序降温过程中，当温度降到-13～-12℃时，进行“植冰”操作，当温度下降到-60℃～-50℃后再降温至液氮温度；待保存的蜜蜂精子与稀释液混合体积比例为0.5-1:5；

加入所述冷冻保护剂前的混合静置是指：将待保存的蜜蜂精子与稀释液混合，在0～4℃下平衡静置1～2h；

所述加入冷冻保护剂静置是指：加入冷冻保护剂后，将盛有待保存蜜蜂精子的容器置于0～4℃环境温度下，使用蜜蜂精液自动混匀装置，先低速10～30r/min混匀30～35s，再调中速30～60r/min混匀30～35s，静置1～1.5h；

所述稀释液包括：0.01～0.1g/mL的柠檬酸钠、0.001～0.005g/mL的碳酸氢钠、0.0001～0.001g/mL的氯化钾和水；

所述冷冻保护剂包括质量百分比为1％～3％的大豆卵磷脂、质量百分比为4％～10％二甲基亚砜、体积百分比为0.5％～2％的过氧化酶以及溶剂。

2.根据权利要求1所述的蜜蜂精子超低温冷冻保存的方法，其特征在于，将待保存的蜜蜂精子与稀释液混合后，在静置前还包括混匀步骤。

3.根据权利要求2所述的蜜蜂精子超低温冷冻保存的方法，其特征在于，所述混匀步骤是先将容器置于蜜蜂精液自动混匀装置低速10～30r/min混匀10～20s，然后再调中速30～60r/min混匀10～20s。

4.根据权利要求1所述的蜜蜂精子超低温冷冻保存的方法，其特征在于，所述“植冰”操作是指：当温度降到-13℃时，向蜜蜂精子冻存容器中滴加液氮。

5.根据权利要求1所述的蜜蜂精子超低温冷冻保存的方法，其特征在于，所述冷冻保护剂中的溶剂为水。

6.一种蜜蜂精子解冻方法，其特征在于，其包括将采用权利要求1-5任一项所述的蜜蜂精子超低温冷冻保存的方法保存的蜜蜂精子进行解冻后，反复离心，取沉淀物用于蜜蜂人工授精；所述反复离心是指：将解冻后的蜜蜂精子在2000～4000rpm下离心1～5min，弃上清液，加入所述稀释液继续离心，再取沉淀用于蜜蜂人工授精。