[发明专利]一种人脐血或骨髓造血干细胞体外诱导扩增蜕膜样自然杀伤细胞的方法

权利要求书

1.一种从造血干细胞体外诱导扩增蜕膜样自然杀伤细胞的方法，包括：

将CD34⁺造血干细胞在体外进行四个阶段的培养，其中阶段I为CD34⁺造血干细胞的扩增，阶段II为诱导CD34⁺造血干细胞向NK细胞前体的分化，阶段III为诱导NK细胞前体向NK细胞的分化，阶段IV为诱导NK细胞扩增及成熟，

收集CD3^-CD56⁺NK细胞，从而得到蜕膜样自然杀伤细胞，

其中所述培养以含有细胞因子组合I的新鲜基础培养基开始，在培养的阶段I、II、III和IV分别使用含有细胞因子组合I、组合II、组合III和组合IV的新鲜基础培养基进行半量换液培养，其中所述细胞因子组合I为Flt3L和SCF；组合II为Flt3L，SCF和IL-15；组合III为Flt3L，SCF和IL-15；组合IV为IL-15,

其中所述含有细胞因子组合I、II、III和IV的新鲜基础培养基中的各细胞因子浓度分别为组合I：30ng/ml Flt3L，20ng/ml SCF；组合II：30-50ng/mlFlt3L，20-40ng/mlSCF，和20-40ng/ml IL-15；组合III：10-30ng/mlFlt3L，5-15ng/mlSCF，30-50ng/ml IL-15；和组合IV：30-50ng/ml IL-15，

其中所述阶段I为第0-3天，阶段II为第4-14天，阶段III为第15-20天，阶段IV为第21-35天。

2.权利要求1所述的方法，其中所述基础培养基为添加胎牛血清的SCGM培养基。

3.权利要求2所述的方法，其中所述基础培养基为添加10％胎牛血清的SCGM培养基。

4.权利要求1-3任一项所述的方法，其中所述培养在恒温37℃，5％CO₂，相对饱和湿度95％，细胞培养基pH值7.2-7.4的条件下培养。

5.权利要求1所述的方法，其中所述CD34⁺造血干细胞源自脐血或骨髓。