[发明专利]组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系、检测方法及应用

权利要求书

1.过氧化氢荧光探针，其特征在于：过氧化氢荧光探针的结构式为：

。

2.权利要求1所述的过氧化氢荧光探针在组蛋白去甲基化酶LSD1酶活检测体系非治疗目的、去甲基化酶抑制剂筛选和高通量药物筛选中的应用。

3.组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系，其特征在于：包括权利要求1中所述的过氧化氢荧光探针，还包括LSD1的作用底物、黄素腺嘌呤二核苷酸或黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐，检测体系中过氧化氢荧光探针的浓度为3-7μM，黄素腺嘌呤二核苷酸的浓度为3-7μM，LSD1的作用底物的浓度为5-50μM，检测体系的pH值为6.5-8.5。

4.根据权利要求3所述的组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系，其特征在于：过氧化氢荧光探针的浓度为5μM，黄素腺嘌呤二核苷酸或黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐的浓度为5μM，LSD1的作用底物的浓度为25μM。

5.根据权利要求3所述的组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系，其特征在于：所述LSD1的作用底物为二甲基修饰的小肽H3K4me2。

6.根据权利要求5所述的组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系，其特征在于：所述二甲基修饰的小肽H3K4me2组蛋白H3上的氨基酸序列为ARTK(Me2)QTARKSTGGKAPRKQLA。

7.根据权利要求3所述的组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系，其特征在于：所述LSD1的酶活检测体系还包括缓冲溶液和组蛋白去甲基化酶LSD1。

8.根据权利要求7所述的组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系，其特征在于：所述缓冲溶液为NaH₂PO₄，NaH₂PO₄的浓度为40-60mM，去甲基化酶LSD1的浓度为1-3 μM。

9.据权利要求8所述的组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测体系，其特征在于：

NaH₂PO₄的浓度为50mM，去甲基化酶LSD1的浓度为2 μM。

10.组蛋白去甲基化酶LSD1用于非治疗目的的酶活检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

a）取用PBS缓冲溶液加入到 96 孔黑孔板中，加入LSD1蛋白溶液和抑制剂溶液，将黑孔板于37℃下避光孵育1-1.5h；

b）步骤a）中的反应终止之后，随后加入权利要求1所述的过氧化氢荧光探针溶液和二甲基修饰的小肽H3K4me2溶液，将黑孔板于37℃下避光孵育1-1.5h；

c）在激发光 420-480nm，发射光520-580nm处检测荧光强度；

步骤a)中的反应和步骤b)中的反应可同时进行。

11.根据权利要求10所述的组蛋白去甲基化酶LSD1用于非治疗目的的酶活检测方法，其特征在于：组蛋白去甲基化酶LSD1的酶活检测方法还包括预先做出标准曲线的步骤。

12.根据权利要求10所述的组蛋白去甲基化酶LSD1用于非治疗目的的酶活检测方法，其特征在于：所述抑制剂为反苯环丙胺、白藜芦醇中的一种，抑制剂的浓度为40-60μM。

13.根据权利要求10所述的组蛋白去甲基化酶LSD1用于非治疗目的的酶活检测方法，其特征在于：抑制剂的浓度为50μM。