[发明专利]公共引物介导的多重定量PCR检测技术在转基因大豆检测中的应用

说明书

本发明公开了公共引物介导的多重定量PCR检测技术在转基因大豆检测中的应用，具体检测我国农业农村部允许进口的6种转基因大豆。在每对特异性引物的5’^,端均加上一段公共引物,形成特异性嵌合引物。多重PCR检测体系扩增出特异性片段，GeXP检出各转基因大豆片段长度，GeXP多重检测体系检测敏感性可达到为1 ng/µL;扩增产物测序结果进一步说明了引物扩增的特异性。本发明建立的基于GeXP系统的多重PCR定量检测技术,可以准确鉴别6种转基因大豆,为转基因大豆及其他转基因产品提供了新型的检测方法。

技术领域

本发明属于转基因大豆检测技术，具体涉及公共引物介导的多重定量PCR检测技术研究及在转基因大豆检测中的应用。

背景技术

转基因食品的安全问题一直是社会的热点问题, 建立一种能够鉴别这些转基因食品的高通量检测方法对消费者的知情权具有重要的意义。核酸检测是转基因食品检测的主要技术和未来发展的必然趋势, 食品核酸检测技术主要包括PCR系列技术(如单重PCR、多重PCR及荧光定量PCR等)、数字PCR技术、Southern杂交、恒温扩增技术、基因芯片技术及高通量测序等。由于受检食品成分不明确, 目前针对食品核酸检测技术主要采用多重PCR、荧光定量PCR、基因芯片和高通量测序技术。荧光定量PCR技术因荧光检测通道限制, 检测靶标一般在6种以内。基因芯片技术及高通量测序主要应用于人体的基因诊断, 技术上可以应用于食品检测, 但食品检测收费低廉, 此技术难以满足食品经济、快速的检测需求。目前, 多重PCR因在一个PCR管中同时检测多个靶标分子, 具有高效性、敏感性、经济和简便性等优点, 在食品安全核酸检测技术中受到广泛关注。然而该技术目前主要用于定性分析, 难以进行定量检测。

发明内容

本发明将多重PCR扩增与GeXP高通量检测结合起来, 在传统PCR的基础上引入荧光标记的公共引物, 在特异性引物与模板结合后, 公共引物与特异性引物结合合成新链,并作为新的模板链进行扩增。若干个循环之后, 扩增后的产物均带上了荧光标记。通过GeXP系统所提供的DNA Standard Size可获得产物的bp数大小, 对检测样品定性分析; 通过GeXP检测产物荧光信号强度, 如建立标准曲线, 可实现对检测样品的相对含量测定,实现定量分析, 目前关于此方面的研究相对较少。

本发明采用如下技术方案：

公共引物介导的多重定量PCR检测技术研究及在转基因大豆检测中的应用，提取待检测产品基因组DNA作为模板，在嵌合引物与荧光公共引物存在下采用两步退火温度法进行PCR反应，对PCR产物进行GeXP系统检测即完成产品中转基因大豆成分的检测。

本发明公开了利用公共引物介导的多重定量PCR检测技术进行产品中转基因大豆成分检测的方法，包括以下步骤，提取待检测产品基因组DNA作为模板，在嵌合引物与荧光公共引物存在下采用两步退火温度法进行PCR反应，对PCR产物进行GeXP系统检测即完成产品中转基因大豆成分的检测。

本发明公开了嵌合引物与荧光公共引物在多重定量PCR检测产品中转基因大豆成份中的应用。

本发明中，所述公共引物的序列为SEQ ID NO.1，在其5’端进行Cy5荧光染料标记；所述嵌合引物为SEQ ID NO.2至SEQ ID NO.13。

本发明中，转基因大豆的品种为MON7701、DP356043、CV-127、MON87769、MON87705和MON87708。