[发明专利]一种母乳外泌体及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种母乳外泌体及其制备方法与应用，具体为母乳外泌体在制备肠道上皮屏障蛋白保护剂或者损伤修复剂中的应用。现有技术公开了母乳外泌体促进肠道细胞迁移与增殖，对抗肠道损伤，但是没有给出母乳外泌体对肠道上皮屏障蛋白的作用启示。本发明创造性的提出母乳外泌体在制备肠道上皮屏障蛋白保护剂中的应用，为母乳外泌体的新应用，扩展了母乳外泌体的应用范围。

技术领域

本发明属于新生儿科技术领域，具体涉及母乳外泌体及其制备方法与应用。

背景技术

新生儿坏死性小肠结肠炎（NEC）为一种获得性疾病，是多种原因引起的肠黏膜损害，使之缺血、缺氧，导致小肠、结肠发生弥漫性或局部坏死的一种疾病。尽管新生儿医疗和全球新生儿重症监护室（NICUs）的建立，新生儿坏死性小肠结肠炎（NEC）仍是一种毁灭性疾病，特别是早产儿。外泌体是从细胞中释放的微小（100-200 nm）小泡，携带蛋白质、微RNA（miRNA）和信使RNA（mRNA），可以信号和调控细胞间行为，作为粒径纳米级的天然囊泡具有介导细胞间信号转导、抗原呈递和兔疫应答等功能。母乳中富含外泌体，可促进细胞增殖和迁移，减轻炎症，对新生儿相关疾病具有保护潜能，现有技术分析母乳性黄疸患儿肠道菌群特征,筛选与差异细菌有相互作用位点的母乳外泌体miRNA,说明miRNA可能通过调节乳儿肠道菌群影响新生儿母乳性黄疸的发生发展。利用16S rRNA高通量测序分析两组粪便样本肠道菌群特征,筛选出可能与新生儿胆红素代谢相关的差异性特殊菌种,然后用透射电镜和Western blotting两种方法鉴定从母乳中提取的外泌体囊泡,并通过miRBase数据库预测与特异性细菌基因组有相互作用位点的miRNA,利用荧光定量PCR验证预测的miRNA在母乳外泌体中表达的差异,探究母乳中差异表达的miRNA与肠道菌群的相关性。但是未见母乳外泌体对肠道上皮屏障蛋白的影响报道。

发明内容

本发明公开了母乳外泌体的新应用，公开了母乳外泌体对肠道上皮屏障蛋白的保护。现有技术探究母乳外泌体miRNA与肠道菌群的相关性，通过miRBase数据库预测与E.coli基因组有相互作用位点的miRNA，筛选出组间存在差异表达的分子，经预测，hsa-miR-16-5p与大肠杆菌ATP结合蛋白基因具有相互作用位点。采取预扩增法定量miRNA，结果发现miR-16-5p在两组间表达具有显著差异。但是该研究与母乳外泌体对肠道上皮屏障蛋白的作用无关。

本发明采用如下技术方案：

母乳外泌体在制备肠道上皮屏障蛋白保护剂中的应用。

母乳外泌体在制备结肠炎治疗剂中的应用。

本发明中，母乳为人母乳。母乳外泌体的制备方法为，将母乳离心处理后，取乳清用母乳外泌体提取试剂盒提取，得到母乳外泌体。优选的，离心处理、试剂盒提取都在室温下进行，离心处理为2000×g离心10分钟。

本发明中，保护剂为药物、食物、营养品或者保健品，以母乳外泌体为活性成分即可；治疗剂为药物、食物、营养品或者保健品，以母乳外泌体为活性成分即可。

本发明中，肠道上皮屏障蛋白为肠上皮细胞紧密连接蛋白，具体为咬合蛋白（Occludin）、闭合蛋白（Claudin1）及闭合小环蛋白（ZO-1，一种胞浆蛋白）。

本发明中，结肠炎为新生儿坏死性小肠结肠炎。

目前母乳缓解或者治疗新生儿坏死性小肠结肠炎的机理不明，现有技术公开了母乳外泌体促进肠道细胞迁移与增殖，对抗肠道损伤，但是没有给出母乳外泌体对肠道上皮屏障蛋白的作用启示。本发明创造性的提出母乳外泌体在制备肠道上皮屏障蛋白保护剂中的应用，为母乳外泌体的新应用，扩展了母乳外泌体的应用范围。

附图说明

图1为母乳外泌体的TEM图；

图2为母乳外泌体的粒径分布；

图3为母乳外泌体的蛋白表达电泳图；

图4为母乳外泌体的蛋白含量；