[发明专利]一种基于靶向扩增子富集策略的高通量病原菌检测试剂盒

说明书

本申请提供了一种基于靶向扩增子富集策略的高通量病原菌检测试剂盒，包括DNA提取溶液、文库构建溶液、引物池、MINI柱和96孔板封膜。所述DNA提取溶液包括6mlBufferA、1.25ml蛋白酶K、12mlBufferB、19mlBufferC、17mlBufferD和20mlBufferE；所述文库构建溶液包括5ml5XHiFiMix、3mlAgencournaAMPure、68pmE.coliDH10B标准文库、2mlSwitch溶液、2ml2XTaqManMasterMix和2ml20XTaqManAssay。本申请通过结合环状扩增和二代测序技术，可将病原菌检出率从传统方法的15‑20％提高到30‑35％。提高病原菌检测的准确度以及缩短鉴定所需时间。

技术领域

本申请涉及医学检验技术领域，尤其涉及一种基于靶向扩增子富集策略的高通量病原菌检测试剂盒。

背景技术

病原菌是一种引起疾病的微生物，也可称其为病原微生物。病原菌是指能入侵宿主引起感染的微生物，有细菌、真菌、病毒等。它们能产生致病物质，造成宿主感染。目前，我国仍缺乏病原菌快速敏感的检测和鉴定技术，常规的微生物学检测和鉴定方法费时、费力，病原菌检出率低且难以快速、准确的进行检测。

发明内容

本申请提供了一种基于靶向扩增子富集策略的高通量病原菌检测试剂盒，以解决病原菌检出率低以及鉴定费时费力的问题。

本申请一种基于靶向扩增子富集策略的高通量病原菌检测试剂盒，包括DNA提取溶液、文库构建溶液、引物池、MINI柱和96孔板封膜；

所述DNA提取溶液包括6ml BufferA、1.25ml蛋白酶K、12ml Buffer B、19mlBuffer C、17ml Buffer D和20ml Buffer E；

所述文库构建溶液包括5ml 5X HiFi Mix、3ml AgencournaAMPure、68pm E.coliDH10B标准文库、2ml Switch溶液、2ml 2X TaqManMasterMix和2ml 20X TaqManAssay。

可选的，所述MINI柱的数量为50，所述96孔板封膜的数量为5。

可选的，所述试剂盒操作步骤如下：

使用DNA提取溶液对多个样本DNA进行提取；

使用5X HiFi Mix配制多个样本的DNA及引物池混合反应物；

使用文库构建溶液对多个样本的DNA及引物池混合反应物进行处理，即得到多个样本文库；

在E.coli DH10B标准文库、所述多个样本文库和对照样本中分别加入2XTaqManMasterMix和20X TaqMan Assay混合后，进行PCR扩增以及测序检测。

可选的，使用5X HiFi Mix配制多个样本的DNA及引物池混合反应物，还包括添加2Xprimer pool、gDNA、和Nuclease-free Water；所述5X HiFi Mix、2Xprimer pool、gDNA、和Nuclease-free Water总体积为20μL。

可选的，所述使用文库构建溶液对多个样本的DNA及引物池混合反应物进行处理包括对引物序列进行部分消化以及对未扩增的文库进行纯化。