[发明专利]一种适用于拟茎点霉FS508的过表达载体及其构建方法和应用有效

专利信息
申请号: 202110204404.2 申请日: 2021-02-23
公开(公告)号: CN112852647B 公开(公告)日: 2022-06-07
发明(设计)人: 叶伟;刘珊;章卫民;李赛妮;张维阳;刘洪新;许丽琼 申请(专利权)人: 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心)
主分类号: C12N1/15 分类号: C12N1/15;C12N15/54;C12N15/80;C12P17/06;C12R1/645
代理公司: 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 代理人: 朱双;刘明星
地址: 510070 广东省广*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 一种 适用于 拟茎点霉 fs508 表达 载体 及其 构建 方法 应用
【权利要求书】:

1.一种提高拟茎点霉FS508中抗肿瘤化合物lithocarpins产量的方法,其特征在于,是在拟茎点霉FS508中过表达GPAT基因,所述的GPAT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,是将GPAT基因插入到表达载体中,然后转化至拟茎点霉FS508中进行过表达。

3. 根据权利要求1所述的方法,其特征在于,限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切质粒pBARGPE1-Hygro,根据酶切后的pBARGPE1的序列和GPAT序列,设计GPAT引物pBARGPE1-GPAT-F:5’-gataagcttgatatcgatggcaaaaggggccg-3’, pBARGPE1-GPAT-R:5’-gactctagaggatctcagtggtggtggtggtg-3’,扩增GPAT基因片段,利用同源重组的方法将GPAT基因片段构建到已酶切的质粒pBARGPE1,构建pBARGPE1-GPAT载体,然后将pBARGPE1-GPAT载体通过原生质体转化法导入拟茎点霉FS508原生质体中。

4. 一种产lithocarpins的工程菌株,其特征在于,是在拟茎点霉FS508中过表达GPAT基因而获得的工程菌,所述的GPAT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

5. 一种适用于拟茎点霉FS508的pBARGPE1-GPAT载体的构建方法,其特征在于,是将GPAT基因插入到pBARGPE1载体中,所述的GPAT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

6. 根据权利要求5所述的构建方法,其特征在于,限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切质粒pBARGPE1-Hygro,根据酶切后PBGEⅠ的序列和GPAT序列,设计GPAT引物PBGE1-GPAT-F:5’-gataagcttgatatcgatggcaaaaggggccg-3’, PBGE1-GPAT-R:5’-gactctagaggatctcagtggtggtggtggtg-3’,扩增GPAT基因片段,利用同源重组的方法将GPAT基因片段构建到已酶切的质粒pBARGPE1,构建pBARGPE1-GPAT载体。

7.一种根据权利要求5或6所述的构建方法构建得到的pBARGPE1-GPAT载体。

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