[发明专利]重组腺相关病毒AAV-gas6及应用

说明书

本发明涉及重组腺相关病毒技术领域，具体涉及重组腺相关病毒AAV‑gas6及其制备方法和应用，本发明提供一种重组腺相关病毒AAV‑gas6，含有SEQ ID NO：1所示的核酸序列，本发明还提供了上述重组腺相关病毒AAV‑gas6的制备方法，本发明提供的重组腺相关病毒AAV‑gas6有望用于制备治疗或缓解JEV引起的病毒性脑炎的药物。

技术领域

本发明涉及重组腺相关病毒技术领域，具体涉及重组腺相关病毒AAV-gas6及其制备方法和应用。

背景技术

病毒性脑炎具有较高的致死率和致残率，是人类生命健康的重大威胁之一。在亚洲地区，日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)即流行性乙型脑炎病毒，是引起病毒性脑炎的主要病原体之一。1935年该病毒由日本学者首次从死亡患者脑组织中分离得到，故命名为日本脑炎病毒。JEV属于黄病毒科黄病毒属单股正链RNA病毒，主要由携带病毒的三带喙库蚊通过叮咬人类而传播JEV引起的脑炎在我国称为流行性乙型脑炎或者日本脑炎(Japanese encephalitis，JE)，为自然疫源性疾病。

经过各国学者的多年努力，目前对JEV的认识逐渐深入，而且在JEV防控方面也取得了很多进展，尤其是JEV疫苗的成功开发和使用极大地降低了JE的发病率。然而，由于自然社会环境的变迁和疫苗接种顺从性差异等原因，在一些地区仍会出现JEV局部爆发流行和散在感染。世界范围内每年仍有6～7万个JEV感染患者。我国也是JE的主要流行区域。目前，针对JE患者的治疗尚无特异有效的手段，临床病例的死亡率可达10～15％。JE幸存者中约有30～50％伴有神经精神后遗症，给患者及家庭带来了沉重的负担。JEV具有较高的致死率和致残率，是我国重要的公共卫生问题之一。

发明内容

为了在临床治疗中有效利用gas6分子干预JEV引起的脑炎进展，本发明提供了一种重组腺相关病毒AAV-gas6。

本发明采用的技术方案如下：

重组腺相关病毒AAV-gas6，含有SEQ ID NO：1所示的核酸序列。

进一步的，所述重组腺相关病毒AAV-gas6的制备方法包括如下步骤：

S1、使用BglⅡ和xhoⅠ内切酶处理pAAV-MCS载体，然后将所回收片段与同样用BglⅡ和xhoⅠ双酶切的SEQ ID NO：1所示的核酸序列连接，得到重组AAV-gas6质粒；

S2、用S1制备的重组AAV-gas6质粒和辅助载体质粒pAAV-RC、pHelper共同转染腺相关病毒包装细胞，得到重组腺相关病毒AAV-gas6。

进一步的，SEQ ID NO：1所示的核酸序列的获得方法如下：

对小鼠的组织提取总RNA，逆转录为cDNA后，设计合成gas6基因编码区上、下游引物，并引入限制性内切酶酶切位点BglⅡ和xhoⅠ，PCR扩增得到小鼠gas6表达基因，即SEQ IDNO：1所示的核酸序列；

所述上游引物如SEQ ID NO：2所示，所述下游引物如SEQ ID NO：3所示。

更进一步的，所述腺相关病毒包装细胞为AAV-293细胞。

本发明还提供了所述重组腺相关病毒AAV-gas6在制备治疗或缓解JEV引起的病毒性脑炎的药物中的应用。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：