[发明专利]快速高效检测雪峰虫草不同菌株交配型的方法及引物组

说明书

本发明公开了一种快速高效检测雪峰虫草不同菌株交配型的方法及引物组，包括步骤一、将待检测物与雪峰虫草MAT1‑1交配型引物组或雪峰虫草MAT1‑2交配型引物组混合，得到混合反应液；雪峰虫草MAT1‑1交配型引物组包括序列SEQ ID NO:1、序列SEQ ID NO:2、序列SEQ ID NO:3和序列SEQ ID NO:4；所述雪峰虫草MAT1‑2交配型引物组包括序列SEQ ID NO:5、序列SEQ ID NO:6、序列SEQ ID NO:7和序列SEQ ID NO:8；步骤二、将混合反应液加热进行环介导等温扩增；步骤三、根据混合反应液颜色得到检测结果。本发明的检测结果特性强，简单快速，不需要PCR热变形、温度循环、胶电泳和紫外显影等步骤，只需将试剂混合后置于恒温水浴锅中反应，通过混合液的颜色即可快速区分交配型，实现了区分雪峰虫草交配型的高效、快速检测。

技术领域

本发明属于生物领域，尤其涉及一种快速高效检测雪峰虫草不同菌株交配型的方法及引物组。

背景技术

虫草是寄生于昆虫、植物和少数真菌上的一类真菌的总称，隶属于子囊菌门(Ascomycota)，粪壳菌纲(Sordariomycetes)，肉座菌目(Hypocreales)。已知的子囊菌均为二极性交配系统，由一对交配型位点决定，根据自交是否可育，有性生殖方式分为同宗结合和二极性异宗结合，同宗结合的子囊菌能由单个菌株完成有性生殖，异宗结合子囊菌的有性生殖过程需要互补交配型菌株共同参与。交配型基因位于真菌交配系统的交配型位点，编码有性繁殖的主要调控因子，在真菌有性生殖、子实体发育和遗传进化等方面发挥着决定性作用。因此对不同菌株交配型的研究，为菌种鉴定、改良和子实体的培育提供理论基础，具有重要理论和实践价值。

雪峰虫草(Ophiocordyceps xuefengensis)于2013年首次被报道，为线虫草菌属雪峰虫草菌O.xuefengensis寄生于疖蝙蛾幼虫(Phassus nodus ChuWang)形成的真菌子座和僵虫的复合体，其寄主疖蝙蛾幼虫生长于马鞭草科植物大青(Clerodendrumcyrtophyllum Turcz.)近地面根或茎中，是迄今发现的最大的虫草，与冬虫夏草O.sinensis互为姐妹群。在湖南地区，被认为是冬虫夏草的天然替代品，是湖南洞口县瑶族用药，具有止咳化痰、补肾壮阳和增强免疫功能等作用。雪峰虫草为异宗结合真菌，具有MAT1-1和MAT1-2两种交配型，其有性生殖需要两种交配型菌株的参与。因此，研究快速检测菌株交配型的方法，对于培育雪峰虫草子实体具有重要的应用价值。

目前，用PCR方法对子囊菌交配型基因进行研究和检测的报道不断增多，但这类方法存在鉴定效率低，周期长，步骤繁琐，需要PCR预变形、温度循环、胶电泳和紫外显影等步骤。

名词解释：Bst DNA polymerase：Bst DNA聚合酶。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种快速高效检测雪峰虫草不同菌株交配型的方法及引物组。本发明的检测结果特性强，简单快速，不需要PCR热变形、温度循环、胶电泳和紫外显影等步骤，只需将试剂混合后置于恒温水浴锅中反应，通过混合液的颜色即可快速区分交配型，实现了分雪峰虫草交配型的高效、快速检测。

为达到上述技术效果，本发明的技术方案是：

一种引物组，包括雪峰虫草MAT1-1交配型引物组和雪峰虫草MAT1-2交配型引物组；雪峰虫草MAT1-1交配型引物组包括序列SEQ ID NO:1、序列SEQ ID NO:2、序列SEQ IDNO:3和序列SEQ ID NO:4；所述雪峰虫草MAT1-2交配型引物组包括序列SEQ ID NO:5、序列SEQ ID NO:6、序列SEQ ID NO:7和序列SEQ ID NO:8。

一种快速高效检测雪峰虫草不同菌株交配型的方法，包括如下步骤：