[发明专利]Spondin 1和HE4联合用作早期卵巢癌生物标志物以及试剂盒

说明书

本发明涉及Spondin 1和HE4联合用作早期卵巢癌生物标志物以及试剂盒，属于免疫检测技术领域。本发明公开了检测来自对象的样品中Spondin 1和HE4水平的试剂在制备用于预测、评价或诊断所述对象的早期卵巢癌的试剂盒中的用途。本发明还提供了用于预测、评价或诊断对象的早期卵巢癌的试剂盒，其能够有效用于卵巢癌的早期筛查，通过本发明提供的试剂盒，显著提高了对象中卵巢癌的预测、评价和诊断的灵敏度和特异性，极大地降低了早期卵巢癌检测中的假阳性率。

技术领域

本发明大体上涉及免疫检测技术领域，具体涉及将Spondin 1和HE4组合用作早期卵巢癌生物标志物，以及由其制得的试剂盒。

背景技术

卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，对女性生命造成严重威胁。由于卵巢深居盆腔，体积小，发病时缺乏典型症状，因而，卵巢癌的早期诊断较为困难，已成为技术难题。临床发现时，常常已经发展至中晚期。而发展至中晚期，尤其在发生转移之后，即便通过卵巢上皮癌手术进行治疗，其复发率和5年生存率均较低。因此，卵巢癌的早期诊断对于降低转移、提高5年生存率具有重要意义。目前在临床上，卵巢癌的诊断主要依据阴道超声检查(TVU)和血液中卵巢癌标志物的检测。对于卵巢癌标志物，尽管中华医学会妇科肿瘤学分会推荐HE4与CA125的联合应用，然而，单一HE4对I期卵巢癌辅助诊断的灵敏度比CA125更高，但也仅为45.9％；而HE4和CA125联合检测的灵敏度在I期卵巢癌中并未得到提升(参见Moore RG,Brown AK,Miller MC等，The use of multiple novel tumor biomarkers forthe detection of ovarian carcinoma in patients with a pelvic mass.GynecolOncol,2008,108:402-408)。

因此，仍然缺乏准确可靠的肿瘤标志物用于卵巢癌的早期诊断，急需开发一些新的具有诊断价值的卵巢癌血清标志物。理想的标志物需要在卵巢癌恶变的早期阶段即能敏感和特异性地从外周血中检出。

市售试剂盒大多采用ELISA法，其原理是：将CA125抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的CA125与连接于固相载体上的抗体结合，然后加入生物素化的CA125抗体，将未结合的生物素化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CA125呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值)，计算样品浓度。然而，该方法受到较大的操作者主观影响。需要提供一种减少人为误差的检测试剂盒。

Spondin 1蛋白(uniprot.org中登录号为UniProtKB-Q9HCB6)，也被称为F-spondin，在人中由SPON1基因编码，长度为807个氨基酸，是一种细胞粘附蛋白，在体外可促进脊髓和感觉神经元细胞的附着以及神经突的生长。通过相似性分析，认为其可能有助于脊髓和周围神经系统中轴突的生长和引导。然而，从未公开过将HE4和Spondin 1联合用于早期卵巢癌诊断的生物标志物。

【参考文献】

[专利文献1]：CN108008132A；

[专利文献2]：CN103954761A。

发明内容

本发明一般性地涉及早期卵巢癌生物标志物，并且特别地涉及通过测量生物标志物组合Spondin 1和HE4的水平来预测、评价和诊断早期卵巢癌的方法和应用，并且还提供用于预测、评价和诊断早期卵巢癌的试剂盒。本发明提供的方法和试剂盒特别地用于上皮性卵巢癌，并且更特别地用于早期卵巢癌(即I期或II期卵巢癌)，从而提供了一种便于操作、灵敏度高、特异性高、能够有效地用于卵巢癌的早期筛查的方法和试剂盒。为了实现本发明的上述目的，本发明采用如下技术方案：