[发明专利]一种在裙带菜中构建永久F2孢子体群体的方法

权利要求书

1.一种在裙带菜中构建永久F₂孢子体群体的方法，其特征在于：

1）选择形态和基因型差别大的纯合亲本孢子体，待其成熟后，分别从中分离雌、雄配子体克隆；

2）将上述F₁雌、雄配子体克隆进行杂交，获得F₁孢子体，待其成熟后选择一株释放游孢子，分离获得大量的F₂配子体克隆；

3）从上述F₂配子体克隆中随机选择相同数量的雌、雄配子体克隆，而后将雌雄配子体采用随机1对1配对的方式进行杂交，获得永久F₂孢子体群体；其中，随机1对1配对可进行一至多轮；

所述步骤1）纯合亲本孢子体为双单倍体；双单倍体孢子体可通过孤雌生殖和雌雄同体配子体自交获得；

所述步骤2）和3）中F₁或F₂雌、雄配子体克隆进行杂交完成从配子体到孢子体生活史过程为：

将F₁或F₂雌、雄配子体在PES海水培养基中以温度18-20℃，光照强度50－80µmolphotons m^-2s^-1，光周期12h白天：12h黑夜；静止培养至幼孢子体达到1mm；并每3-5天更换一次PES海水培养基；

将培养至1mm的幼孢子体在PES海水培养基中，以温度18-20℃, 光照强度50－80µmolphotons m^-2s^-1，光周期12h白天：12h黑夜，并充入空气的条件下培养至幼孢子体长度达到1cm，并每2-3天更换一次PES海水培养基；

培养至1cm的幼孢子体在4-18℃，于自然海水中充入空气通过翻滚培养，进而完成孢子体群体的生活史，形成成熟的孢子体；并每天更新一次自然海水，所述自然海水中添加终浓度为2.5 mgL^-1 的NaNO₃和终浓度为0.25mgL ^-1的KH₂PO₄。

2.按权利要求1所述的在裙带菜中构建永久F₂孢子体群体的方法，其特征在于：所述PES培养基为每1L消毒海水中添加20 mL制备液；其中，制备液为每1 L蒸馏水中加入NaNO₃3.5g、KH₂PO₄ 0.5g、铁金属液250 mL和金属液250 mL；经溶解消毒，冷却待用；铁金属液为，每1L蒸馏水中加入Fe(NH₄)₂(SO₄)₂·6H₂O 0.702g和Na₂EDTA 0.6 g；金属液为，每1L蒸馏水中加入Na₂EDTA 1g，H₃BO₃ 1.14g，FeCl₃·6H₂O 49mg ，MnSO₄·H₂O 164mg，ZnSO₄·7 H₂O22mg和CoSO₄·7 H₂O 4.8mg。

3.按权利要求1-2任意一项所述的在裙带菜中构建永久F₂孢子体群体的方法，其特征在于：所述永久F₂孢子体群体的亲本配子体克隆长期保存的条件为温度18-20℃, 光照强度5µmol photons m^-2s^-1，光周期12h白天：12h黑夜；并每2个月更换一次PES海水培养基。