[发明专利]一种利用色素蛋白的氧化损伤检测抗氧化剂抗氧化效力的方法有效
| 申请号： | 202010181575.3 | 申请日： | 2020-03-16 |
| 公开（公告）号： | CN111323606B | 公开（公告）日： | 2021-08-10 |
| 发明（设计）人： | 何海伦;刘聪伶;易翠萍;刘丹;李乾斌;黄嘉丰;宦冉;王猛 | 申请（专利权）人： | 中南大学 |
| 主分类号： | G01N33/82 | 分类号： | G01N33/82;G01N33/72;G01N33/68 |
| 代理公司： | 长沙市融智专利事务所(普通合伙) 43114 | 代理人： | 袁靖 |
| 地址： | 410083 湖南*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 色素 蛋白 氧化 损伤 检测 抗氧化剂 效力 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种利用色素蛋白的氧化损伤检测抗氧化剂抗氧化效力的方法，其特征在于，对色素蛋白进行全波长扫描得出蛋白特征吸收峰；在含有色素蛋白和自由基的体系中分别加入阳性抗氧化剂和待测抗氧化剂，根据色素蛋白在特征吸收峰处的吸光值变化，利用抗氧化能力公式计算出待测抗氧化剂相当于阳性抗氧化剂的抗氧化当量；所述的色素蛋白为藻蓝蛋白和牛血红蛋白；
具体包括以下步骤：
（1）对色素蛋白进行全波长扫描得出蛋白特征吸收峰；
（2）以自由基的浓度梯度，设置多个反应体系，每个反应体系中均加入浓度和体积固定的色素蛋白，反应总体积固定，在色素蛋白的特征吸收峰波长处连续测定OD值；
（3）以阳性抗氧化剂的浓度梯度，设置多个反应体系，每个反应体系中均加入浓度和体积固定的色素蛋白、自由基，以不加抗氧化剂的一组为对照组，反应总体积固定，在色素蛋白的特征吸收峰波长处连续测定OD值，找到阳性抗氧化剂的最高和最低浓度检测限；
（4）在步骤（3）的体系中将阳性抗氧化剂换成待测抗氧化剂，检测待测抗氧化剂的抗氧化效力；根据抗氧化能力公式（1.1）计算待测抗氧化剂的抗氧化能力；
其中，AUCsample, AUCcontrol和 AUCtrolox分别代表待测样品组、对照组和阳性抗氧化剂组曲线与x轴的积分面积，Ctrolox代表阳性抗氧化剂的浓度，Wsample代表待测样品的质量浓度；
当色素蛋白为藻蓝蛋白、自由基由AAPH自由基引发剂引发时，反应体系包括：100 μL终浓度为0.25mg/mL的藻蓝蛋白和80 μL不同浓度的AAPH，剩余体积用无菌超纯水补齐，反应总体积200 μL，反应试剂都用无菌超纯水配制，反应温度45℃；检测波长为620 nm，每间隔30 s读一次蛋白OD值，连续测定60 min；
采用trolox为阳性抗氧化剂或者待测抗氧化剂，以及色素蛋白为藻蓝蛋白、自由基由AAPH自由基引发剂引发时，反应体系包括：100 μL终浓度为0.25 mg/mL的藻蓝蛋白，80 μL终浓度为75mM的AAPH和20 μL不同浓度的阳性抗氧化剂或者待测抗氧化剂，反应总体积200μL，反应试剂都用无菌超纯水配制，反应温度45℃；检测波长为620 nm，每间隔30 s读一次蛋白OD值，连续测定至所有反应均到达平台期；
当色素蛋白为牛血红蛋白、自由基由AAPH自由基引发剂引发时，反应体系包括：100 μL终浓度为0.15 mg/mL的牛血红蛋白和80 μL不同浓度的AAPH，剩余体积用无菌超纯水补齐，反应总体积200 μL，反应试剂都用质量分数为0.9%的氯化钠溶液配制，反应温度50℃；检测波长为405 nm，每间隔30 s读一次蛋白OD值，连续测定60 min；
采用trolox为阳性抗氧化剂或者待测抗氧化剂，以及色素蛋白为牛血红蛋白、自由基由AAPH自由基引发剂引发时，反应体系包括：100 μL终浓度为0.15 mg/mL的牛血红蛋白，80μL终浓度为40mM的AAPH和20 μL不同浓度的阳性抗氧化剂或者待测抗氧化剂，反应总体积200 μL；反应试剂都用质量分数为0.9%的氯化钠溶液配制，反应温度50℃；检测波长为405nm，每间隔30 s读一次蛋白OD值，连续至所有反应均到达平台期。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，待测抗氧化剂包括：植物乳杆菌793发酵产物、藻蓝蛋白酶解产物、鱼胶原酶解产物、合成多肽PMRGGYHY及其合成多肽FCVLRP。
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- 本发明提供了一种用于维生素B12检测的解离剂，所述解离剂为单组分冻干试剂；所述单组分冻干试剂的原液包括：缓冲剂、结合剂、还原剂、保护剂与pH调节剂；其中，所述缓冲剂的摩尔浓度为20～100mM，所述结合剂的重量体积百分比为0.05％～0.2％，所述还原剂的重量体积百分比为0.05％～0.2％，所述保护剂的重量体积百分比为3％～8％，所述pH调节剂的重量体积百分比为1％～2％。本发明还提供了上述解离剂的制备方法与应用。本发明解离剂配方简单，采用单组份试剂并使用冻干工艺，使用前使用超纯水进行复溶放入化学发光试剂架R1中即可参与反应，一步操作解离样本中的维生素B12。
- 一种25-羟基维生素D解离剂及其制备方法与应用-202211219313.7
- 孙裔雷;周志图 - 无锡百泰克生物技术有限公司
- 2022-09-30 - 2023-01-06 - G01N33/82
- 本发明公开了一种25‑羟基维生素D解离剂，其特征在于，包括如下组分：10‑500mM PBS、0.005‑0.05g/mL正辛基‑β‑D‑麦芽糖苷、0.01‑0.1g/mL 3‑[(3‑胆固醇氨丙基)二甲基氨基]‑2‑羟基‑1‑丙磺酸、0.001‑0.01g/mL十二烷基硫酸钠、0.001‑0.01g/mL BSA、0.001‑0.01g/mL氯化钠，PC300 0.01‑1％，pH6.0‑8.0。本发明对人体无毒性作用，对使用者、生产者无直接或间接毒性危害和风险；本发明成分多数为新型高效去垢表面活性剂，对蛋白解离效果明显。
- 一种用于内分泌室间质评的质控品-202010574207.5
- 欧明坤 - 中山市滔略生物科技有限公司
- 2020-06-22 - 2022-10-14 - G01N33/82
- 本发明提供一种用于内分泌室间质评的质控品，所述的质控品包括来源于人的血清混合物；所述血清混合物为以下16项内分泌指标中的一项或多项处于高值状态的血清的混合物：FT3、T3、FT4、T4、TSH、VB12、FolateBA、E2‑6III、PRGE孕酮、TSTO、FSH、LH2、PRL催乳素、COR、CPS、IRI。本发明的质控品选择人血清作为基质，在一定程度上减小了质控品与样品间的差异。本发明提供的质控品，制备方法简单，且均匀度和稳定性好，质控偏差小，有较好的应用前景。
- 解离维生素D及其代谢物的稀释液、定量检测方法及试剂盒-202210816088.9
- 陈立;禄亚峰;许稳健;颜文豪;吴金玲;叶鹏辉;李俊峰 - 深圳秀朴生物科技有限公司
- 2022-07-12 - 2022-10-11 - G01N33/82
- 本发明公开了一种解离维生素D及其代谢物的稀释液、定量检测维生素D及其代谢物的方法及试剂盒。一种解离维生素D及其代谢物的稀释液，其由缓冲液、强氧化剂、非极性溶剂、表面活性剂、金属络合剂及还原性糖组成。本发明使用强氧化剂破环蛋白释放维生素D，非极性溶剂为脂溶性的维生素D增加溶剂性，表面活性剂使解离的游离维生素D与后续维生素D抗体反应更具有特异性，金属络合剂和还原性糖去除多余的氧化剂，终止解离反应及防止多余的氧化剂破坏后续参与反应的维生素D抗体，从而保证参与反应抗体的浓度一致，确保测试结果的准确性。
- 一种维生素B12定量检测试剂盒及其应用-202210903606.0
- 杨付锐;何春芹;郭宣城;靳晓英 - 山东博科诊断科技有限公司
- 2022-07-28 - 2022-09-27 - G01N33/82
- 本发明提供了一种维生素B12定量检测试剂盒及其应用，涉及生物技术领域。所述维生素B12检测试剂盒包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、试剂C和发光底物，其中，所述抗试剂的制备步骤为：将内因子与异硫氰酸荧光素偶联，VB12衍生物与碱性磷酸酯酶偶联，分别获得异硫氰酸荧光素标记的内因子和碱性磷酸酶标记的VB12衍生物，将异硫氰酸荧光素标记的内因子和碱性磷酸酶标记的VB12衍生物加入抗试剂缓冲液中，充分搅拌；磁微粒试剂的组分为异硫氰酸荧光素抗体偶联的羧基磁珠。本发明既能提高检测的灵敏度和可靠性，又能降低成本，还可配合全自动化学发光免疫分析仪使用。
- 一种昆虫体内生物素含量测定方法-201910850178.8
- 栾军波;任飞荣;白冰 - 沈阳农业大学
- 2019-09-10 - 2022-09-27 - G01N33/82
- 本发明涉及一种昆虫体内生物素含量测定方法，包括以下步骤：（1）昆虫样品提取处理；（2）配制生物素梯度溶液；（3）制备生物素测定培养液；（4）生物素测定；本检测方法所用的植物乳酸杆菌、各类培养基等均为市场常见菌株或耗材，成本低，显著降低生物素检测的成本，培养方法简单；本发明检测时间为22小时，比商业化试剂盒检测时间缩短了22‑26小时，提高了昆虫维生素检测的效率。
- 一种25羟基维生素D检测试剂盒-202210628691.4
- 李志明;胡晓飞;董雯;周东 - 山东博科生物产业有限公司
- 2022-06-06 - 2022-09-23 - G01N33/82
- 本发明属于化学免疫分析领域，具体涉及一种25羟基维生素D检测试剂盒；本发明的25羟基维生素D检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2，试剂R1中含有CAPS‑甘氨酸‑EDTA缓冲液，复合增敏剂，复合表面活性剂，1,3‑二羟甲基‑5,5二甲基海因；试剂R2中含有CAPS‑甘氨酸‑EDTA缓冲液，复合胶乳稳定剂，鼠抗人25OH维生素D单克隆抗体包被的胶乳颗粒溶液，复合表面活性剂，1,3‑二羟甲基‑5,5二甲基海因；通过新型的复合增敏剂、复合表面活性剂、复合胶乳稳定剂，优化各组分含量，科学配比，显著改善了试剂盒的稳定性和线性范围，显著增强了试剂盒的灵敏度和准确度。
- 一种食品维生素检测方法-202210558736.5
- 梁华海 - 梁华海
- 2022-05-20 - 2022-09-16 - G01N33/82
- 本发明公开了一种食品维生素检测方法，涉及食品检测技术领域。该食品维生素检测方法采用的装置，包括装置本体，所述装置本体的顶部固定安装有支撑架，所述支撑架的表面固定安装有升降装置，所述装置本体的顶部固定套接有固定筒，所述升降装置的输出端上固定安装有压板。该食品检测装置，在水果放入固定筒的内部时，水果会处于受力板的凹槽内部，通过升降装置带动压板向下移动，通过压板可以对凹槽内部的水果进行挤压，水果的果肉通过受力板上的弧形通孔移动到受力板的底部，水果中的果核通过凸形板上的圆形通孔会移动到凸形板的顶部，通过橡胶片对果核的阻挡可以将果核限制在凸形板上，从而可以去除水果中的果核。
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