[发明专利]检测人阿司匹林抵抗基因多态性的组合物、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及分子生物学检测领域，更具体的，涉及人阿司匹林抵抗基因多态性检测领域。提供了一种组合物，其检测人阿司匹林抵抗基因多态性；与此同时，还提供了所述组合物用于检测人阿司匹林抵抗基因多态性的用途、包含所述组合物的试剂盒以及用于检测人阿司匹林抵抗基因多态性的方法，使用本发明的组合物以及方法，检测CYP2C19基因、ITGB3基因、PEAR1基因、PTGS1基因的SNP位点，使得检测阿司匹林抵抗的能力更加全面，且灵敏度高，检测周期短。

技术领域

本发明属于分子生物学检测领域，更具体的，属于人阿司匹林抵抗基因多态性检测领域。

背景技术

阿司匹林(aspirin)是最为常见的抗血小板治疗药物。最早作为非甾体抗炎药用于解热镇痛，现多用于预防血栓等疾病，是治疗急性冠状动脉综合征和经皮冠状动脉介入术后抗栓的基础药物，其作为心肌梗死、缺血性脑卒中和外周动脉闭塞性疾病的一级和二级预防用药被广泛应用(广泛应用于心脑血管疾病)。阿司匹林经肠道吸收后很快被代谢成为活性产物水杨酸，随血液分布全身。水杨酸可以与血小板内的环氧合酶(cyclooxygenase，COX)活性部分丝氨酸残基发生不可逆的乙酰化反应，使酶失活，抑制花生四烯酸(arachidonic acid，AA)的代谢，从而抑制血栓素A2(thromboxane A2，TXA2)的生成，血栓素A2能够诱导血小板使其发生聚集反应，而血栓素生成受到抑制则可以很好地起到抗凝作用。

临床发现并不是所有常规服用阿司匹林的患者都能获得一致的抑制血小板聚集和防止血栓和栓塞事件发生的临床疗效，于是提出阿司匹林抵抗(aspirin resistance，AR)这一概念，其发生率约5％～60％，且存在明显种族差异性。关于阿司匹林抵抗(阿司匹林反应低下)的遗传易感性方面的报道有：包括细胞色素P450 2C19(CYP2C19)、COX-1、COX-2、GPIα、GPIbα、GPIIIbα、ADP受体P2RY1和P2RY12、凝血因子XIII(FXIII)基因异常与阿司匹林抵抗相关联，然而，人种差异的存在，使这些基因不完全适合中国人群。根据相关基因与药物剂量、疗效及不良反应的关系，以及中国人群的分布频率，建议检测CYP2C19、GPIIIaPLA2、PEAR1、COX-1相关基因型，以指导阿司匹林的精准治疗。

阿司匹林主要由CYP2C19代谢，CYP2C19酶活性下降会导致阿司匹林的血小板抑制作用减弱，主要检测*2(rs12769205)及*17(rs12248560)(代谢、剂量疗效、毒性/不良反应)。

血小板受体包括特异性结合纤维蛋白原和血管假性血友病因子的糖蛋白(GP)IIb/IIIa(ITGB3)，特异性结合ADP的P2Y受体以及与胶原结合的GPIa-IIa、GPVI和GPIb-IX-V受体。血小板膜糖蛋白IIb/IIIa复合体(GPIIb/IIIa)是纤维蛋白原的受体，它介导血小板的聚集，GPIIIa亚基PLA存在多态性，主要检测ITGB3基因rs5918位点，表现为PLA1/A1和PLA2/A2纯合型、PLA1/A2杂合型。PLA2/A2使得GPIIIb/IIIa受体结构发生改变，使血小板之间发生交叉连接，导致血小板聚集，疗效较差。

表达在血小板和内皮细胞上的I型膜蛋白(PEAR1)。该受体的磷酸化可能促进αIIbβ3信号的激活放大，使大量血小板脱颗粒，引起血小板之间不可逆的聚集反应。主要检测rs12041331位点，GG等位基因对阿司匹林应答好，突变基因型AA或AG的患者使用阿司匹林时的心肌梗死发生率和死亡率会增高。

环氧化酶(cyclooxygenase，COX)是前列腺素合成过程中的重要限速酶，它有两种同工酶：COX-1和COX-2，分别由PTGS1和PTGS2基因编码。阿司匹林是非选择性的COX酶抑制剂，COX-1是其主要底物酶，为组织结构酶，在多种组织中表达，在无核组织血小板中同样有表达。PTGS1基因主要检测rs5794位点，突变单体型CGCGCC显著增加了阿司匹林抵抗的发病风险，野生型CACGCC对阿司匹林抵抗有保护作用。