[发明专利]表达肠道病毒71型抗原的重组汉逊酵母的细胞破碎方法及其在制备手足口病疫苗中的应用

权利要求书

1.一种表达肠道病毒71型抗原的重组汉逊酵母细胞破碎方法，其特征在于，包括下列步骤：

收集重组汉逊酵母菌体，加入细胞洗涤缓冲液洗涤重悬，离心后弃上清液；

加入细胞破碎缓冲液充分重悬菌体；

加入苯甲基磺酰氟溶液、聚山梨酯80和酸化玻璃珠，制备成菌体悬液；

将所述菌体悬液置于细胞破碎器中振荡破碎，破碎后离心取上清液，得到细胞破碎液。

2.如权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述细胞洗涤缓冲液通过以下步骤制备：

按重量计，取磷酸氢二钠3.0-3.5份、磷酸二氢钠一水合物0.1-0.2份、氯化钠8.5-9.0份，加入纯化水充分溶解混匀，调节pH值至7.5-8.5。

3.如权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述细胞洗涤缓冲液通过以下步骤制备：

按重量计，取磷酸氢二钠3.3-3.4份、磷酸二氢钠一水合物0.1-0.2份、氯化钠8.7-8.8份，加入纯化水充分溶解混匀，调节pH值至8.0。

4.如权利要求1或2所述的工艺，其特征在于，所述细胞破碎缓冲液通过以下步骤制备：

按重量计，取磷酸氢二钠5.5-6.5份、磷酸二氢钠一水合物1.0-1.5份、氯化钠25.0-35.0份、乙二胺四乙酸二钠0.2-0.5份、按体积计丙三醇20-80，加入纯化水充分溶解混匀，调节pH值至7.0-7.5。

5.如权利要求1或2所述的工艺，其特征在于，所述细胞破碎缓冲液通过以下步骤制备：

按重量计，取磷酸氢二钠5.9-6.0g、磷酸二氢钠一水合物1.1-1.2g、氯化钠29.0-30.0g、乙二胺四乙酸二钠0.3-0.4g、按体积计丙三醇40-60份，加入纯化水充分溶解混匀，调节pH值至7.4。

6.如权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述重组汉逊酵母菌体的收集量为1-3份。

7.如权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述苯甲基磺酰氟溶液的加入量为0.01-0.03体积份，浓度为150mmol/L-250mmol/L。

8.如权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述聚山梨酯80的加入量为0.001-0.003体积份；和/或者，所述酸化玻璃珠的加入量为1-3重量份。

9.如权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述细胞破碎器转速为100-500rpm，振荡时间为30-60分钟；和/或者，破碎后离心转速6000-12000rpm，时间为5分钟。

10.如权利要求1-9中任一项所述的细胞破碎方法在制备手足口病疫苗中的应用。