[发明专利]一种靶向NKG2D配体和CD19的双靶点嵌合抗原受体及其表达载体和应用

说明书

本发明公开了一种靶向NKG2D配体和CD19的双靶点嵌合抗原受体及其表达载体和应用，属于肿瘤免疫药物领域。所述双靶点嵌合抗原受体包括：依次连接的信号肽、靶向NKG2D配体的NKG2D胞外区、连接片段、靶向CD19的单链抗体、加长的CD8α铰链区、跨膜区、共刺激因子和胞内信号肽，该双靶点嵌合抗原受体不仅能够特异性识别靶向NKG2D配体或CD19抗原这两个单个靶点表达的肿瘤细胞，还可以识别靶向NKG2D配体和CD19抗原共同表达的肿瘤细胞，该双靶点的CAR‑T具有更强的抗肿瘤活性，能够避免低丰度抗原表达的阳性肿瘤细胞产生免疫逃逸，从而降低了复发风险。

技术领域

本发明涉及肿瘤免疫药物领域，特别涉及一种NKG2D配体和CD19的双靶点嵌合抗原受体及其表达载体和应用。

背景技术

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病之一，据不完全统计，目前中国的恶性肿瘤年发病病例达到400多万例，其中，血液肿瘤的发病率不断提高，发病年龄也有所提前，发病人群从过去的以中老年人居多，逐步扩散到年轻患者中，这可能与现代人生活压力大、环境污染加剧、生活习惯不健康等因素有关。

嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptor，CAR)技术是近些年发展非常迅速的一种细胞治疗技术。目前，虽然在CD19CAR-T细胞取得了很大的成功，但是接受CD19CAR-T细胞治疗后的病患中，多达三分之二的患者会出现CD19表达丧失导致抗原逃逸、肿瘤细胞继续生长而表现癌症复发的情况。

发明内容

为了解决现有技术的问题，本发明实施例提供了一种靶向NKG2D配体和CD19的双靶点嵌合抗原受体及其表达载体和应用。所述技术方案如下：

一方面，本发明提供了一种靶向NKG2D配体和CD19的双靶点嵌合抗原受体，所述双靶点嵌合抗原受体包括：依次连接的信号肽、靶向NKG2D配体的NKG2D胞外区、连接片段、靶向CD19的单链抗体、加长的CD8α铰链区、跨膜区、共刺激因子和胞内信号肽，所述信号肽的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示，所述靶向NKG2D配体的NKG2D胞外区的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：2所示，所述靶向CD 19的单链抗体的核苷酸序列如序列表中SEQID NO：3所示，所述加长的CD8α铰链区的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：4所示，所述跨膜区的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：5所示，所述胞内信号肽的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：6所示。

具体地，所述共刺激因子包括：CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、ICOS、NKG2D和B7-H3中的至少一种。

进一步地，所述共刺激因子为4-1BB，且所述共刺激因子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：10所示。

具体地，所述连接片段为(G₄S)n或(EAAAK)n，n为1、2或3。

进一步地，所述连接片段为(G₄S)，n为1，所述连接序列的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：8所示。

另一方面，本发明提供了一种表达载体，所述表达载体包括载体和上述的双靶点嵌合体抗原受体。

具体地，所述载体为慢病毒载体、逆转录病毒载体、电转导载体或睡美人转座子载体。

又一方面，本发明提供了一种上述的表达载体的应用，所述应用包括：将所述表达载体作为抗B细胞系恶性血液肿瘤的药物。

具体地，所述抗B细胞系恶性血液肿瘤包括：非霍奇金淋巴瘤、B细胞慢性淋巴细胞白血病、B细胞急性淋巴细胞白血病和弥漫性大B细胞淋巴瘤。