[发明专利]犬腺病毒II型、犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬副流感病毒的四重实时荧光定量PCR检测

说明书

本发明公开了一种犬腺病毒II型、犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬副流感病毒的四重实时荧光定量PCR检测，提供了用于该实时荧光定量PCR检测的引物和探针组，并基于该引物和探针组提供了用于同时鉴别检测犬腺病毒II型、犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬副流感病毒的试剂盒。利用该试剂盒的检测操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性好，不仅可以用于对犬腺病毒II型、犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬副流感病毒进行定性鉴别检测，还可以实现准确定量，能在疫苗生产过程中的质量监控和合理化配苗中应用。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域中的兽医动物病原检测，具体涉及一种用于犬腺病毒II型、犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬副流感病毒的四重实时荧光定量PCR检测方法、检测试剂盒及其专用引物和TaqMan探针。

背景技术

犬瘟热病毒(Canine distemper virus，CDV)、犬细小病毒(Canine prvovirus，CPV)、犬副流感病毒(Canine parainfluenza virus，CPIV)和犬腺病毒II型(Canineadenovirus II， CAV-II)是犬病毒性传染病暴发和流行的主要病原体。CDV感染引起的犬瘟热主要有呼吸型、消化型、神经型和混合型4种，CDV感染可引起全身性的免疫抑制，病死率极高。CPV主要引起犬的急性出血性胃肠炎和幼犬急性心肌炎。CPIV感染主要引起犬的呼吸道疾病，是犬传染性呼吸系统疾病重要的病原之一。CAV-II型引起与呼吸道疾病和肠炎相关的犬接触性呼吸道疾病，但不引起肺炎症状，可引起幼犬咳嗽又叫犬窝咳。

这四种病毒单一感染或混合感染均可给养犬业带来严重的打击，四种犬病原临床症状较为相似，且常伴有混合感染，给临床诊断造成了一定的困难。文献CN102618666A建立了用于同时检测犬瘟热病毒、犬细小病毒、I型和II型犬腺病毒的多重PCR检测引物；刘畅等人进行了CDV、CPV、CAV-2及CPIV多重PCR的建立及应用的研究(刘畅等，CDV、CPV、 CAV-2及CPIV多重PCR的建立及应用，《中国动物检疫》，2017年11期)；文献CN 106521036A 公开了一种鉴别犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒和犬腺病毒2型的四重PCR检测方法。但这些多重PCR检测方法均存在检测灵敏度低的问题，不能实现对犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒和犬腺病毒2型进行有效的鉴别和定量检测。

发明内容

针对现有技术中存在的问题的一个或多个，本发明一个方面提供一种用于对犬腺病毒II 型(CAV-II)、犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)和犬副流感病毒(CPIV)进行四重实时荧光定量PCR检测及鉴别的引物和TaqMan探针组，包含：

用于检测犬腺病毒II型的上游引物(CAV₂-F)和下游引物(CAV₂-R)，其中所述上游引物(CAV₂-F)的核苷酸序列如SED ID NO：9所示，所述下游引物(CAV₂-R)的核苷酸序列如SED ID NO：10所示；

用于检测犬腺病毒II型的TaqMan探针(CAV₂-P)，所述TaqMan探针(CAV₂-P)的核苷酸序列如SED ID NO：17所示；

用于检测犬瘟热病毒的上游引物(CDV-F)和下游引物(CDV-R)，其中所述上游引物(CDV-F)的核苷酸序列如SED ID NO：11所示，所述下游引物(CDV-R)的核苷酸序列如 SEDID NO：12所示；

用于检测犬瘟热病毒的TaqMan探针(CDV-P)，所述TaqMan探针(CDV-P)的核苷酸序列如SED ID NO：18所示；

用于检测犬细小病毒的上游引物(CPV-F)和下游引物(CPV-R)，其中所述上游引物(CPV-F)的核苷酸序列如SED ID NO：13所示，所述下游引物(CPV-R)的核苷酸序列如 SEDID NO：14所示；