[发明专利]犬腺病毒II型、犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬副流感病毒的四重实时荧光定量PCR检测

权利要求书

1.用于对犬腺病毒II型(CAV-II)、犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)和犬副流感病毒(CPIV)进行四重实时荧光定量PCR检测及鉴别的引物和TaqMan探针组，其特征在于，包含：

用于检测犬腺病毒II型的上游引物(CAV₂-F)和下游引物(CAV₂-R)，其中所述上游引物(CAV₂-F)的核苷酸序列如SED ID NO：9所示，所述下游引物(CAV₂-R)的核苷酸序列如SED IDNO：10所示；

用于检测犬腺病毒II型的TaqMan探针(CAV₂-P)，所述TaqMan探针(CAV₂-P)的核苷酸序列如SED ID NO：17所示；

用于检测犬瘟热病毒的上游引物(CDV-F)和下游引物(CDV-R)，其中所述上游引物(CDV-F)的核苷酸序列如SED ID NO：11所示，所述下游引物(CDV-R)的核苷酸序列如SED IDNO：12所示；

用于检测犬瘟热病毒的TaqMan探针(CDV-P)，所述TaqMan探针(CDV-P)的核苷酸序列如SED ID NO：18所示；

用于检测犬细小病毒的上游引物(CPV-F)和下游引物(CPV-R)，其中所述上游引物(CPV-F)的核苷酸序列如SED ID NO：13所示，所述下游引物(CPV-R)的核苷酸序列如SED IDNO：14所示；

用于检测犬细小病毒的TaqMan探针(CPV-P)，所述TaqMan探针(CPV-P)的核苷酸序列如SED ID NO：19所示；

用于检测犬副流感病毒的上游引物(CPIV-F)和下游引物(CPIV-R)，其中所述上游引物(CPIV-F)的核苷酸序列如SED ID NO：15所示，所述下游引物(CPIV-R)的核苷酸序列如SEDID NO：16所示；

用于检测犬副流感病毒的TaqMan探针(CPIV-P)，所述TaqMan探针(CPIV-P)的核苷酸序列如SED ID NO：20所示；

所述TaqMan探针为经过荧光标记的，其5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团，且所述TaqMan探针的3’端已经磷酸化处理。

2.根据权利要求1所述的引物和TaqMan探针组，其特征在于，

所述TaqMan探针(CAV₂-P)的5’端标记有Quasar 705荧光报告基团，3’端标记有BHQ3荧光淬灭基团；

所述TaqMan探针(CDV-P)的5’端标记有Cy5荧光报告基团，3’端标记有BHQ2荧光淬灭基团；

所述TaqMan探针(CPV-P)的5’端标记有FAM荧光报告基团，3’端标记有BHQ2荧光淬灭基团；

所述TaqMan探针(CPIV-P)的5’端标记有HEX荧光报告基团，3’端标记有BHQ2荧光淬灭基团。

3.用于对犬腺病毒II型、犬细小病毒、犬瘟热病毒和犬副流感病毒进行四重实时荧光定量PCR检测及鉴别的试剂盒，其特征在于：

包括权利要求1或2所述的引物和TaqMan探针组；

使用所述试剂盒时的25μL实时荧光定量PCR检测体系中所述引物和TaqMan探针的用量优选为：10μM的4×混合引物Mix 0.75μL，10μM的4×混合探针0.5μL，其中所述4×混合引物为CAV₂-F、CAV₂-R、CDV-F、CDV-R、CPV-F、CPV-R、CPIV-F、CPIV-R的等浓度混合，所述4×混合探针为CAV₂-P、CDV-P、CPV-P、CPIV-P的等浓度混合。