[发明专利]MDM-2及其干扰序列在制备逆转非小细胞肺癌对吉非替尼耐药药物中的应用

说明书

本发明属于基因工程领域，特别MDM2作为标志物预测吉非替尼耐药性以及MDM‑2干扰序列在制备逆转非小细胞肺癌对吉非替尼耐药药物中的应用；通过合成MDM2特异性的干扰序列，应用RNA抗干扰技术下调耐吉非替尼的肺癌细胞中MDM2的蛋白表达水平可以起到逆转肺癌细胞对吉非替尼耐药的作用。

技术领域

本发明属于基因工程领域，特别涉及MDM-2干扰序列在制备逆转非小细胞肺癌对吉非替尼耐药药物中的应用。

背景技术

肺癌是目前世界上罹患癌症的男性和女性中导致死亡的最主要的病因，非小细胞肺癌(Non small cell lung cancer,NSCLC)占据了所有肺癌患者的85％。目前在全球范内非小细胞肺癌每年的新增病例及死亡人数都在不断的攀升，也广大的医务工作人员也带来了严峻的考验。而治愈性的手术切除通常只适用于早期发病。各种分期的肺癌五年生存率只有15％。对于检查出的疾病为局限期的患者来说，生存率也仅为49％，这说明，即使是早期的诊断，该疾病的复发和死亡也是很普遍的，因此，为肺癌患者寻找新的治疗方法十分关键。

吉非替尼是一种可逆性小分子酪氨酸激酶抑制剂，结构与ATP类似，通过与ATP竞争可逆性的与EGFR结合，达到阻断其下游信号通路的目的，目前已经被多个国家批准用于治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)。酪氨酸激酶催化下游分子磷酸化，随即启动一系列下游的信号通路，包括PLCγ、PI3K、小的G蛋白、P21ras、rasGTP酶激活蛋白(GAP)、生长因子受体结合蛋白2(grb2)和src 激酶家族等。其中研究较明确的主要有两条途径：一条是ras/erk/MAPK途径。另一条是PI3K-AKT-PKC-IKK途径，导致NFκB移位至核内，而将信息传递入细胞核。EGFR活化后经过上述信号传导途径最终引起一系列相关基因活化，导致肿瘤细胞持续增殖，凋亡抑制，以及包括血管形成因子在内的多种细胞因子合成，促使肿瘤细胞转移并导致放化疗抗拒。对于EGFR突变型的非小细胞肺癌患者有着较高的有效率，并且由于其毒性反应低，耐受性良好已经成为非小细胞肺癌治疗最有力武器之一，但是多数患者在使用吉非替尼一段时间后(通常为 8-10个月)会出现疾病再次进展，根本原因是由于肿瘤细胞由于长期暴露于吉非替尼后产生了对吉非替尼的获得性耐药，目前已知的两种肺癌吉非替尼获得性耐药的重要机制是“EGFR 19外显子缺失且发生T790M突变或其他继发性突变”和“Met扩增旁路激活通路”，但这两种机制尚不足以完全解释EGFR-TKI获得性耐药，仍有大约30％左右的患者产生吉非替尼获得性耐药但仍机制不明。因此探索除EGFR突变状态外的其它吉非替尼耐药机制，逆转肺癌细胞对吉非替尼的耐药显得尤为重要。

MDM2作为p53的经典抑制因子为人们所熟知，它通过阻断p53介导的基因转录和降解p53来实现其癌蛋白功能。对MDM2的研究已广泛而深入，但多局限于癌细胞凋亡、抗增殖以及细胞周期停滞等方面。然而逐渐有越来越多的证据显示MDM2可以不依赖于p53发挥其癌蛋白的功能。无野生型p53而MDM2 表达增高的肿瘤细胞仍然具有高侵袭潜能，且患者往往出现化疗失败的情况。本研究关注于MDM2在肺癌耐吉非替尼的组织样本和细胞株中表达水平，分析 MDM2作为预测吉非替尼耐药分子标志物和逆转吉非替尼耐药的可能性。

发明人进行进一步研究首次发现p-MDM2蛋白的表达水平EGFR-TKI耐药密切相关，可作为吉非替尼耐药的分子标志物，通过设计p-MDM2特异性的干扰序列下调肺癌细胞中p-MDM2蛋白的表达水平可以部分逆转肺癌细胞对吉非替尼的耐药性，为制备逆转非小细胞肺癌对吉非替尼耐药药物提供基础和实验依据。

发明内容

发明目的

本发明的目的是提供MDM2及其干扰序列的新用途。

技术方案

MDM2在制备作为非小细胞肺癌对吉非替尼耐药标志物中应用。