[发明专利]一种桑黄子实体抗癌活性核苷类化合物PBN1的制备方法

说明书

本发明公开了一种桑黄子实体抗癌活性核苷类化合物PBN1的制备方法。将桑黄子实体处理获得桑黄子实体粉，加入乙醇溶液超声处理，再依次进行水浴回流和抽滤处理，离心取上清液，浓缩后冷冻干燥；双蒸馏水溶解，离心取上清液，过滤膜后上大孔吸附树脂柱吸附处理，乙醇溶液洗脱后收集洗脱峰的洗脱液，浓缩并冷冻干燥；双蒸馏水溶解，离心取上清液，过滤膜后上阳离子交换柱，NaCl水溶液梯度洗脱，收集水相洗脱峰的洗脱液，浓缩并冷冻干燥后得均一的核苷类化合物PBN1。本发明制备产物纯度均一，对人胃癌细胞的生长有明显的抑制作用，对正常细胞的人胚胎肾细胞生长无不良影响，可用于抗癌产品开发。

技术领域

本发明涉及了一种抗癌活性新化合物及制备方法，尤其是涉及了一种桑黄子实体抗癌活性核苷类化合物PBN1的制备方法。

背景技术

核苷类化合物是生物细胞维持生命活动的基本物质，包括核苷、碱基及核苷类似物，具有抗病毒、抗氧化、抗菌、抗疲劳、提高人体免疫力、抗癌等生理活性，现已被广泛应用于抗癌、抗病毒、疾病诊断等方面。目前用于临床和正在研究的核苷类抗癌药物有数十种，它们主要是通过干扰癌细胞的DNA合成或者核酸转录的过程，来抑制蛋白质的合成，从而达到治疗癌症的效果，展示出了不可取代的独特作用。当前核苷类抗癌药物主要来源于化学合成和从天然中药材中提取分离这二个方面，化学合成存在步骤复杂、异构体不好分离、转化率低、成本高、污染环境等问题。因此，从天然中药材中筛选抗癌活性核苷类化合物，深受国内外研究者的高度关注。

桑黄(Phellinus baumii)是一种具有多种药理作用的真菌子实体，因寄生于桑树而得名，中医认为其能利五脏、软坚、排毒、止血等。现代药理学研究发现桑黄的抗癌效果极其显著，有“森林黄金”的美誉。核苷类化合物是桑黄的重要活性成分之一，但有关桑黄核苷类化合物及其抗癌作用机理还不清楚，这阻害了桑黄药用水平提高及药用范围扩大。分离纯化制备桑黄抗癌活性核苷类化合物，对于推进桑黄药用开发具有积极的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种桑黄子实体抗癌活性核苷类化合物PBN1的制备方法，是采用回流提取、NKA-Ⅱ型大孔吸附树脂柱分离、SP-Sepharose FastFlow阳离子交换柱纯化的方法，制备桑黄子实体抗癌活性核苷类化合物PBN1。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一、一种桑黄子实体抗癌活性核苷类化合物PBN1的制备方法：

1)将桑黄子实体处理获得桑黄子实体粉；

2)取桑黄子实体粉加入乙醇溶液并进行超声处理；

3)超声处理后的溶液依次进行水浴回流和抽滤处理，然后离心处理收集上清液；

4)上清液浓缩后冷冻干燥，得到粗核苷类化合物；

5)用双蒸馏水将粗核苷类化合物溶解，离心取上清液后，过滤膜再上NKA-Ⅱ型大孔吸附树脂柱吸附处理；

6)用乙醇溶液洗脱后收集洗脱峰的洗脱液，浓缩并冷冻干燥后得到核苷类化合物干燥物；

7)用双蒸馏水将核苷类化合物干燥物溶解，离心取上清液后，过滤膜再上SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换柱，用NaCl水溶液进行梯度洗脱，收集水相洗脱峰的洗脱液，冷冻干燥后得到均一的核苷类化合物，取名PBN1。

方法工艺条件具体为：

1)桑黄子实体于-50℃下真空干燥36h，于-15℃下超微粉碎5min，过80～100目筛，得到桑黄子实体粉；

2)取桑黄子实体粉，加入乙醇溶液，混匀后，在30℃下用超声波清洗仪以500W功率53KHz频率的超声波磁场作用30min；