[发明专利]一种用于同时检测4种登革热病毒分型的试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于同时检测4种登革热病毒分型的试剂盒，所述试剂盒包括如下试剂：RT‑PCR反应液，RT‑PCR酶，阳性质控品，阴性质控品；其中，所述RT‑PCR反应液包含一步反应RT‑qPCR缓冲液及登革病毒I型上游特异性引物、登革病毒I型下游特异性引物、登革病毒I型封堵引物、登革病毒I型探针；登革病毒II型上游特异性引物、登革病毒II型下游特异性引物、登革病毒II型封堵引物、登革病毒II型探针；登革病毒III型上游特异性引物、登革病毒III型下游特异性引物、登革病毒III型封堵引物和登革病毒III型探针；登革病毒IV型上游特异性引物、登革病毒IV型下游特异性引物、登革病毒IV型封堵引物和登革病毒IV型探针。该试剂盒具有特异性强、检测时间短的优点。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，尤其涉及一种用于同时检测4种登革热病毒分型的试剂盒。

背景技术

登革热由受染于四种登革热病毒中任何一种病毒的伊蚊叮咬所传播。该病发生在世界上的热带和亚热带地区。被具传染性的蚊虫叮咬之后3-14天出现症状。症状的范围包括从轻度发热到使人丧失能力的高热，并伴有严重头痛、眼球后疼痛、肌肉和关节痛以及出疹。没有针对登革热的特效抗病毒药物。登革热病毒(Dengue virus)属黄病毒科黄病毒属，为单正链RNA病毒，根据包膜蛋白E抗原性不同分为4个血清型。目前，国内外对登革病毒的诊断方法，主要是血清学试验、病毒培养和PCR，其中，血清学试验、组织培养。具有灵敏度低、免疫交叉反应以及周期长等缺点；常规PCR存在特异性不足的问题。

多重荧光PCR技术采用多色荧光对多条种特异性探针进行标记，配合多重PCR技术和快速热启动Taq酶，可以在同一个PCR反应管中对多个病毒同时进行快速扩增，大大提高了检测效率；另外各色荧光的增长信号与相应PCR产物的增长量成等比关系，并被自动化荧光检测仪收集，最后可通过分析荧光增长曲线达到检测病原体类型的目的。

目前，针对登革病毒I型、II型、III型和IV型的体外诊断试剂盒大多采用单重RT-PCR反应，需要进行四次检测才能完成登革病毒的分型；少量采用双重RT-PCR反应，需要进行两次检测才能完成登革病毒的分型。无论登革病毒I型、II型、III型和IV型单重检测试剂，还是双重检测试剂，在面对大规模样本检测时，无疑会耗费大量的人力物力，延长诊断时间，因此，目前需要建立一种能够同时检测登革病毒I型、II型、III型和IV型的四重RT-PCR方法，来提高登革病毒分型检测效率。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于同时检测4种登革热病毒分型的试剂盒，旨在解决现有技术中对登革病毒分型检测特异性低、时间长的问题。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种用于同时检测4种登革热病毒分型的试剂盒，所述试剂盒包括如下试剂：RT-PCR反应液，RT-PCR酶，阳性质控品，阴性质控品；

其中，所述RT-PCR反应液包含一步反应RT-qPCR缓冲液，以及登革病毒I型上游特异性引物、登革病毒I型下游特异性引物、登革病毒I型封堵引物、登革病毒I型探针；登革病毒II型上游特异性引物、登革病毒II型下游特异性引物、登革病毒II型封堵引物、登革病毒II型探针；登革病毒III型上游特异性引物、登革病毒III型下游特异性引物、登革病毒III型封堵引物和登革病毒III型探针；登革病毒IV型上游特异性引物、登革病毒IV型下游特异性引物、登革病毒IV型封堵引物和登革病毒IV型探针。